文采報春苣苔PwDREB2s基因，在非生物脅迫應答中發揮什麼作用？
前言：文采報春苣苔隸屬于苦苣苔科報春苣苔屬，是屬内唯一葉片特化為肉質的類群之一，原生于裸露石灰岩矮石山上的深岩縫中，具有木質根狀莖和肉質葉片。
高溫與幹旱脅迫在文采報春苣苔原生境中常伴随出現，但其應答幹熱複合脅迫的遺傳基礎尚未見報道。
本研究依據文采報春苣苔幹熱脅迫下的轉錄組資料，采用同源克隆法，通過PCR擴增從文采報春苣苔中分離PwDREB2s基因，并對其序列結構與表達模式進行分析，推測文采報春苣苔中的PwDREB2s基因對其幼苗适應環境能力的重要意義。
A-2亞組亞型1的所有成員中均存在CMⅣ-1組分和CMⅣ-2組分，且部分成員如AtDREB2A/2C、OsDREB2B和ZmDREB2A等在C端還存在CMⅣ-3組分。
PwDREB2A/2AL1/2AL2轉錄因子被歸入亞型1，其CMⅣ-1組分的左翼序列和CMⅣ-2組分均含NLS基序，能夠強烈或中度應答低溫、熱激、滲透、高鹽及氧化脅迫處理。
序列長度較短的亞型2成員，如AtDREB2E/2H，通常C端轉錄激活域也較短，它們要麼不響應脅迫，要麼對脅迫應答但沒有轉錄激活活性，PwDREB2D/2DL可能是被縮短的蛋白，僅含CMⅣ-1組分，缺乏CMⅣ-3組分。
PwDREB2D的N端也包含1個非典型NLS基序，能被脅迫中度或輕度誘導。
亞型3成員PwDREB2F僅含CMⅣ-1組分，但隻能輕微或不應答逆境脅迫，PwDREB2EL1/2EL2僅含CMⅣ-3組分，與RAP2.4同處于A-6亞組。
拟南芥RAP2.4a/b的表達受高溫、高鹽與幹旱脅迫的上調，并能激活下遊基因的表達。
構樹BpDREB2基因的編碼蛋白也屬于A-6亞組，能被幹旱和高鹽脅迫強烈誘導，但在低溫和ABA處理下沒有明顯變化。
文采報春苣苔中PwDREB2EL2基因僅能微弱應答滲透脅迫，PwDREB2EL1基因幾乎不響應任何脅迫，這與拟南芥RAP2.4和構樹BpDREB2基因的表達模式明顯不同。
這些結果暗示了不同物種中的DREB2基因，可能具有不同的轉錄激活機制，并在非生物脅迫應答中發揮不同的作用。
文采報春苣苔PwDREB2A/2AL1/2AL2/2D基因能同時應答脫水、高鹽、熱激及低溫脅迫，且在幹旱或熱激處理24h後仍能檢測到上述大部分成員的表達，說明文采報春苣苔幹熱抗性的維持可能與内源DREB2基因受幹熱脅迫誘導表達後的持續時間正相關。
在裸露石山環境下，文采報春苣苔通常會遭受兩種或兩種以上的組合脅迫，與單一脅迫相比，複合脅迫對其生長發育的損傷可能更為嚴重。
從PwDREB2s候選基因的qRT-PCR分析結果來看，與單獨的模拟幹旱和熱激脅迫相比，模拟幹旱-熱激複合脅迫中PwDREB2A/2AL1/2AL2/2D基因的轉錄本水準并未全部顯著積累。
而在土壤栽培的肉質葉樣品中，與對照組（CK2）相比，單一自然幹旱（D2）、單一熱激（H2）及自然幹旱-熱激組合脅迫（DH2）會引起PwDREB2A/2AL1/2AL2基因轉錄反應的增強，但無法誘導PwDREB2D基因的表達。
其中PwDREB2AL1/2AL2基因與AtDREB2A基因的表達模式類似，既可以分别受幹旱和熱激脅迫的單獨誘導，也可以受到其交叉誘導，進而在文采報春苣苔自然幹旱-高溫複合脅迫應答中發揮重要的調控作用。
對同時受模拟幹旱與熱激脅迫誘導的PwDREB2A/2AL1/2AL2/2D基因，進行實時熒光定量PCR分析，結果表明PwDREB2D基因對幹熱脅迫的應答具有組織特異性，僅在根狀莖中能被強烈誘導。
結論：
肉質葉中PwDREB2A/2AL1/2AL2基因在自然幹旱-熱激複合脅迫下的轉錄反應顯著強于對照組，但PwDREB2D基因的表達量則與對照組無顯著差異。
PwDREB2AL1/2AL2基因既能分别受單一自然幹旱和熱激脅迫的強烈誘導，也能被幹熱複合脅迫顯著誘導。
由此可見，PwDREB2AL1/2AL2基因參與了文采報春苣苔幹熱組合脅迫的應答調控，可為苦苣苔抗逆種質的創制提供新的基因儲備。
