文采报春苣苔PwDREB2s基因，在非生物胁迫应答中发挥什么作用？
前言：文采报春苣苔隶属于苦苣苔科报春苣苔属，是属内唯一叶片特化为肉质的类群之一，原生于裸露石灰岩矮石山上的深岩缝中，具有木质根状茎和肉质叶片。
高温与干旱胁迫在文采报春苣苔原生境中常伴随出现，但其应答干热复合胁迫的遗传基础尚未见报道。
本研究依据文采报春苣苔干热胁迫下的转录组数据，采用同源克隆法，通过PCR扩增从文采报春苣苔中分离PwDREB2s基因，并对其序列结构与表达模式进行分析，推测文采报春苣苔中的PwDREB2s基因对其幼苗适应环境能力的重要意义。
A-2亚组亚型1的所有成员中均存在CMⅣ-1组分和CMⅣ-2组分，且部分成员如AtDREB2A/2C、OsDREB2B和ZmDREB2A等在C端还存在CMⅣ-3组分。
PwDREB2A/2AL1/2AL2转录因子被归入亚型1，其CMⅣ-1组分的左翼序列和CMⅣ-2组分均含NLS基序，能够强烈或中度应答低温、热激、渗透、高盐及氧化胁迫处理。
序列长度较短的亚型2成员，如AtDREB2E/2H，通常C端转录激活域也较短，它们要么不响应胁迫，要么对胁迫应答但没有转录激活活性，PwDREB2D/2DL可能是被缩短的蛋白，仅含CMⅣ-1组分，缺乏CMⅣ-3组分。
PwDREB2D的N端也包含1个非典型NLS基序，能被胁迫中度或轻度诱导。
亚型3成员PwDREB2F仅含CMⅣ-1组分，但只能轻微或不应答逆境胁迫，PwDREB2EL1/2EL2仅含CMⅣ-3组分，与RAP2.4同处于A-6亚组。
拟南芥RAP2.4a/b的表达受高温、高盐与干旱胁迫的上调，并能激活下游基因的表达。
构树BpDREB2基因的编码蛋白也属于A-6亚组，能被干旱和高盐胁迫强烈诱导，但在低温和ABA处理下没有明显变化。
文采报春苣苔中PwDREB2EL2基因仅能微弱应答渗透胁迫，PwDREB2EL1基因几乎不响应任何胁迫，这与拟南芥RAP2.4和构树BpDREB2基因的表达模式明显不同。
这些结果暗示了不同物种中的DREB2基因，可能具有不同的转录激活机制，并在非生物胁迫应答中发挥不同的作用。
文采报春苣苔PwDREB2A/2AL1/2AL2/2D基因能同时应答脱水、高盐、热激及低温胁迫，且在干旱或热激处理24h后仍能检测到上述大部分成员的表达，说明文采报春苣苔干热抗性的维持可能与内源DREB2基因受干热胁迫诱导表达后的持续时间正相关。
在裸露石山环境下，文采报春苣苔通常会遭受两种或两种以上的组合胁迫，与单一胁迫相比，复合胁迫对其生长发育的损伤可能更为严重。
从PwDREB2s候选基因的qRT-PCR分析结果来看，与单独的模拟干旱和热激胁迫相比，模拟干旱-热激复合胁迫中PwDREB2A/2AL1/2AL2/2D基因的转录本水平并未全部显著积累。
而在土壤栽培的肉质叶样品中，与对照组（CK2）相比，单一自然干旱（D2）、单一热激（H2）及自然干旱-热激组合胁迫（DH2）会引起PwDREB2A/2AL1/2AL2基因转录反应的增强，但无法诱导PwDREB2D基因的表达。
其中PwDREB2AL1/2AL2基因与AtDREB2A基因的表达模式类似，既可以分别受干旱和热激胁迫的单独诱导，也可以受到其交叉诱导，进而在文采报春苣苔自然干旱-高温复合胁迫应答中发挥重要的调控作用。
对同时受模拟干旱与热激胁迫诱导的PwDREB2A/2AL1/2AL2/2D基因，进行实时荧光定量PCR分析，结果表明PwDREB2D基因对干热胁迫的应答具有组织特异性，仅在根状茎中能被强烈诱导。
结论：
肉质叶中PwDREB2A/2AL1/2AL2基因在自然干旱-热激复合胁迫下的转录反应显著强于对照组，但PwDREB2D基因的表达量则与对照组无显著差异。
PwDREB2AL1/2AL2基因既能分别受单一自然干旱和热激胁迫的强烈诱导，也能被干热复合胁迫显著诱导。
由此可见，PwDREB2AL1/2AL2基因参与了文采报春苣苔干热组合胁迫的应答调控，可为苦苣苔抗逆种质的创制提供新的基因储备。
