光緒是清朝倒數第二個皇帝，也是整個封建王朝的倒數第二位皇帝，光緒跟慈禧太後關系看似融洽，其實背地裡也有許多勾心鬥角，就連光緒的死都跟慈禧有關。
關于光緒的死因，民間以及學術界近百年都有着争議，有人說是袁世凱下的手，也有人說是慈禧下的手，但從多方史料以及出土材料來看，慈禧毒殺光緒是闆上釘釘的事情。
首先，第一個證明便是《啟功口述曆史》，啟功的曾祖父曾經在慈禧宮殿前伺候慈禧，一日他看見一個太監從慈禧那出來，并端着一個蓋碗送給了光緒，在這之後，光緒就突然駕崩。這一切，顯得如此的巧合，其中必然會有一些蹊跷。而且啟功本身是雍正皇帝的九代孫，跟光緒也屬于親屬，知道清朝皇室的一些隐秘也不足為奇，他更曾是北京師範大學的教授，中國書法家協會名譽主席，這樣一個公衆人物，其說的每一句話自然都需要斟酌許久，再加上啟功人品是公認的好，是以這段史料可信度十分的高。
第二個證明是，慈禧在晚年的确對光緒産生了殺心，因為光緒有些不聽慈禧的話了，尤其是光緒主戰，慈禧主和以及戊戌變法，這兩件事令慈禧十分的惱火。公元1908年十月時，光緒在自己日記中寫下了“慈禧一定會死在他之前，那時他就要斬殺袁世凱跟李蓮英”這樣的話，不料卻被慈禧得知，于是慈禧怒火沖天，說了一句：“我不能死在他前面。”
第三個證明是《診治光緒帝秘記》，在這裡面有對于光緒臨死之前症狀的描述，其中是這樣說的：“面黑，舌焦黃”“在床上亂滾”，這按中醫的角度來講的确是中毒的症狀，當時光緒身處後宮，護衛森嚴，光緒吃的東西平日也是很講究的，可見能讓他中毒，一定是這個端來東西的人他很信任，才會毫不猶豫的吃下東西，導緻自己中毒，那這樣一個人在整個國家都不多，慈禧便是其中之一。
也有人認為，此事應該是袁世凱所做，但正如上文所說，袁世凱派人端來的東西，光緒是絕對不會輕易吃下，而是會先找小太監試毒，或者幹脆丢掉。因為從光緒的日記中就可以看出他一直在忌憚提防着袁世凱，如此精明的光緒，不可能犯這樣的低級錯誤，輕易吃下袁世凱的東西，也隻有慈禧才能讓光緒沒有那麼大的提防之心。
2008年十一月，光緒的遺骨被發掘，考古學家對光緒的遺骨頭發以及貼身衣物都做了科學的檢測，發現了其中含有砒霜，也就證明了《診治光緒帝秘記》中對光緒死因是中毒的推測。同時再結合上文所述的前兩個證明，完全可以充分的證明光緒便是慈禧所毒殺，這也是目前民間跟學術界最認可的說法。