光绪是清朝倒数第二个皇帝，也是整个封建王朝的倒数第二位皇帝，光绪跟慈禧太后关系看似融洽，其实背地里也有许多勾心斗角，就连光绪的死都跟慈禧有关。
关于光绪的死因，民间以及学术界近百年都有着争议，有人说是袁世凯下的手，也有人说是慈禧下的手，但从多方史料以及出土材料来看，慈禧毒杀光绪是板上钉钉的事情。
首先，第一个证明便是《启功口述历史》，启功的曾祖父曾经在慈禧宫殿前伺候慈禧，一日他看见一个太监从慈禧那出来，并端着一个盖碗送给了光绪，在这之后，光绪就突然驾崩。这一切，显得如此的巧合，其中必然会有一些蹊跷。而且启功本身是雍正皇帝的九代孙，跟光绪也属于亲属，知道清朝皇室的一些隐秘也不足为奇，他更曾是北京师范大学的教授，中国书法家协会名誉主席，这样一个公众人物，其说的每一句话自然都需要斟酌许久，再加上启功人品是公认的好，所以这段史料可信度十分的高。
第二个证明是，慈禧在晚年的确对光绪产生了杀心，因为光绪有些不听慈禧的话了，尤其是光绪主战，慈禧主和以及戊戌变法，这两件事令慈禧十分的恼火。公元1908年十月时，光绪在自己日记中写下了“慈禧一定会死在他之前，那时他就要斩杀袁世凯跟李莲英”这样的话，不料却被慈禧得知，于是慈禧怒火冲天，说了一句：“我不能死在他前面。”
第三个证明是《诊治光绪帝秘记》，在这里面有对于光绪临死之前症状的描述，其中是这样说的：“面黑，舌焦黄”“在床上乱滚”，这按中医的角度来讲的确是中毒的症状，当时光绪身处后宫，护卫森严，光绪吃的东西平日也是很讲究的，可见能让他中毒，一定是这个端来东西的人他很信任，才会毫不犹豫的吃下东西，导致自己中毒，那这样一个人在整个国家都不多，慈禧便是其中之一。
也有人认为，此事应该是袁世凯所做，但正如上文所说，袁世凯派人端来的东西，光绪是绝对不会轻易吃下，而是会先找小太监试毒，或者干脆丢掉。因为从光绪的日记中就可以看出他一直在忌惮提防着袁世凯，如此精明的光绪，不可能犯这样的低级错误，轻易吃下袁世凯的东西，也只有慈禧才能让光绪没有那么大的提防之心。
2008年十一月，光绪的遗骨被发掘，考古学家对光绪的遗骨头发以及贴身衣物都做了科学的检测，发现了其中含有砒霜，也就证明了《诊治光绪帝秘记》中对光绪死因是中毒的推测。同时再结合上文所述的前两个证明，完全可以充分的证明光绪便是慈禧所毒杀，这也是目前民间跟学术界最认可的说法。