高通量測序流程你了解嗎?
玖科醫學。
高通量測序一直是生物醫學研究領域中的熱門,今天跟大家分享一下高通量測序的大緻流程。
·第一步,是樣本接收。核對樣本資訊和檢測項目,安排實驗流程。
·第二步,是病理質控,對石蠟包埋的組織樣本進行病理質控,确認惡性良性腫瘤細胞的含量。
·第三步,是DNA提取。利用試劑盒提出各種原始樣本類型的DNA。
·第四步,是DNA破碎,将提取出的DNA,根據後續測序試劑盒的要求,使用超聲破碎到統一長度。
·第五步,文庫建構。将多個不同樣本的DNA片段,分别加上唯一識别标簽,進行PCR擴增。
·第六步,是PCR擴增。根據樣本不同的檢測項目分組富集,加入相應的捕獲探針,再次進行PCR擴增,以達到高通量測序的要求。
·第七步,是文庫定量将富集得到的混合樣本使用試劑盒,通過QPCR,來判斷混合樣本是否真實,達到高通量測序試劑盒所需的濃度要求,進而調整上機濃度。
·第八步,是文庫高通量測序。将調整好濃度的上機文庫,加入測序試劑盒,按照測序儀的說明書進行操作,測序儀會自動記錄測序資料,以供生物資訊分析使用。
·第九步,是生物資訊分析。樣本資料下機後,計算中心會根據不同實驗項目的要求,對資料使用不同的方法進行分析。
·第十步,是報告生成。根據生物資訊分析的結果,生成一份具體的報告。
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