高通量测序流程你了解吗?
玖科医学。
高通量测序一直是生物医学研究领域中的热门,今天跟大家分享一下高通量测序的大致流程。
·第一步,是样本接收。核对样本信息和检测项目,安排实验流程。
·第二步,是病理质控,对石蜡包埋的组织样本进行病理质控,确认肿瘤细胞的含量。
·第三步,是DNA提取。利用试剂盒提出各种原始样本类型的DNA。
·第四步,是DNA破碎,将提取出的DNA,根据后续测序试剂盒的要求,使用超声破碎到统一长度。
·第五步,文库构建。将多个不同样本的DNA片段,分别加上唯一识别标签,进行PCR扩增。
·第六步,是PCR扩增。根据样本不同的检测项目分组富集,加入相应的捕获探针,再次进行PCR扩增,以达到高通量测序的要求。
·第七步,是文库定量将富集得到的混合样本使用试剂盒,通过QPCR,来判断混合样本是否真实,达到高通量测序试剂盒所需的浓度要求,从而调整上机浓度。
·第八步,是文库高通量测序。将调整好浓度的上机文库,加入测序试剂盒,按照测序仪的说明书进行操作,测序仪会自动记录测序数据,以供生物信息分析使用。
·第九步,是生物信息分析。样本数据下机后,计算中心会根据不同实验项目的要求,对数据使用不同的方法进行分析。
·第十步,是报告生成。根据生物信息分析的结果,生成一份具体的报告。
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