關于PCR實驗室清除核酸擴增産物污染的那些措施，在過去幾年中已認證各類途徑反複學習和實踐過。今天，我們就來聊聊它們的工作原理。
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含氯消毒劑
凡是能溶于水，産生次氯酸的消毒劑統稱含氯消毒劑。
次氯酸确切作用機制尚不明确，但是認為它的氧化作用可以使蛋白變性進而達到有效殺滅細菌、真菌和病毒的作用。
通常所說的含氯消毒劑中的有效氯，并非指氯的含量，而是消毒劑的氧化能力，相當于多少氯的氧化能力。
特點有廣譜、高效、低毒、強刺激性氣味，有腐蝕性、漂白的作用，由于受有機物影響很大，是以不穩定，需要當日配制當日使用。
PCR實驗室常用的含氯消毒劑大都使用84消毒液、含氯消毒片、分析純次氯酸鈉溶液配制。
（1）84消毒液：主要成分為次氯酸鈉。市面上在售的84消毒液有效氯含量因不同廠家略有差異，通常為2%-10%。
（2）含氯消毒片：主要有效成分為三氯異氰尿酸（是一種有機化合物，是一種極強的氧化劑和氯化劑），有效氯含量為450-550mg/片。
（3）分析純次氯酸鈉溶液：屬于高效的含氯消毒劑。一般認為次氯酸是次氯酸鈉滅菌的有效成分。
10%次氯酸鈉溶液：采用分析純次氯酸溶液與純水進行配制。有效氯濃度為0.5%。
次氯酸鈉清除PCR擴增産物污染的原理：
次氯酸鈉能在PCR擴增産物（DNA雙鍊）上造成廣泛的“缺口”，阻礙核酸聚合酶延伸，是以可以用于PCR産物污染的控制。
一般建議PCR實驗室不要直接使用84消毒液或者使用其配制，因其确切濃度未知。
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醇類消毒劑
乙醇溶液成本低，消毒作用快，易揮發，對人和物品一般無損害，被普遍病毒、細菌和真菌等微生物的消毒。
乙醇的作用機制，一般認為乙醇與水混合後有很強的滲透能力，可破壞病原微生物的細胞膜或病毒包膜，導緻其裂解、蛋白變性、死亡或失活。
PCR實驗室常用的乙醇溶液有70%乙醇、75%乙醇。
（1）75%乙醇（酒精）消毒液：商品化的酒精消毒液。
（2）70%乙醇溶液：采用市售分析純無水乙醇與純水進行配制。
乙醇有效的殺菌濃度範圍為60%-90%，濃度低于50%或無水乙醇消毒效果明顯減弱，有研究認為，70%濃度最為有效。
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核酸/核酸酶去除劑
國内外針對新冠病毒核酸檢測的規範要求中，均提到可采用核酸清除劑等試劑進行殘留核酸清除。
這類核酸/核酸酶去除劑的優勢是，采用生物降解或者化學降解的方式有效去除物體表面的DNA/RNA及DNA/RNA酶，對人體無毒，不含腐蝕性酸和堿，不損壞金屬。
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紫外線（UV）照射
每次完成檢測操作後采用紫外燈對實驗台面或相關儀器裝置進行照射，是臨床PCR實驗室不可少的消除或減少擴增污染的一種方法。
紫外線照射清除核酸污染的主要機制是，基于堿基的氧化，進而使單鍊和雙鍊斷裂并在臨近的嘧啶堿基證件形成環丁烷環，環丁烷環形成鍊内嘧啶二聚體，抑制聚合酶介導的鍊延伸。
紫外線時照射的距離、強度和時間對清除核酸污染的效果是非常關鍵的。
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結束語
細節決定成敗，尤其對于實驗環境和操作要求極高的PCR實驗室，任何一個環節做不好都可能影響整個實驗結果。是以，檢驗人應時刻銘記“無核酸”“無基因”的概念，把防污染思想貫穿于整個實驗過程中，嚴格遵守操作規程，保證檢測品質。
【參考資料】
《實時熒光PCR技術》
《新型冠狀病毒感染臨床檢測技術》
來源：驗小六的晚課時間
編輯：任裡程 審校：小冉