一. 序言
1. 生物學特性
霍亂弧菌是革蘭氏陰性菌，弧形或挑逗性，無芽細胞，有菌毛，有些菌株有膜，一端有厚而長的鞭毛，有活性。取霍亂患者的米水樣糞便作為活細菌懸挂滴劑，可以看出細菌運動極其活躍，梭狀或流星狀運動。液體培養液滴染色鏡檢查，可以看到排列得像"魚狀"弧菌。人工培養後，很容易失去電弧，變成一根棒。
營養要求不高，在普通培養基中生長良好，在pH值6.8-10.2的範圍内可以生長，耐堿，在pH值為8.8-9.0的堿性蛋白水或闆内生長良好，因為其他細菌在這個pH值下不易生長，是以堿性蛋白水可以作為選擇性增殖霍亂弧菌的培養基質。
在直徑為2mm的堿性闆菌落上，圓形，光滑透明。霍亂弧菌對熱、幹燥、陽光、化學消毒劑和酸敏感，耐低溫：濕熱55°C，15分鐘，100°C，1-2分鐘，水中0.5ppm氯15分鐘可滅活;霍亂弧菌是氧導向型或醋酸厭氧菌，可在16-44°C下生長，最适宜生長溫度為37°C。
2. 流行病學特征
霍亂弧菌是霍亂的病原體，霍亂是一種急性嚴重腸道感染，其特征是嚴重嘔吐、腹瀉、脫水、急性發作、高傳染性和高死亡率，是一種國際檢疫傳染病。有139個血清型，其中O1和O139可引起霍亂。O1 和 O139 霍亂弧菌是霍亂（一種嚴重的腸道感染）的病原體。當然，人類容易患上霍亂弧菌。霍亂是由攝入被霍亂弧菌污染的食物或水引起的。進入腸道的霍亂弧菌通過鞭打運動穿過腸粘膜表面的粘液層，接近腸粘膜的上皮細胞，并通過普通細菌毛發的作用種植。腸道内的環境有利于霍亂弧菌的繁殖，産生霍亂腸毒素，導緻疾病。
霍亂弧菌的主要原因是霍亂毒素（CHOLERA毒素，CT），這是已知最強的毒素，可引起大量腸液分泌，導緻嚴重的嘔吐和腹瀉，使機體的水分和介電量損失，形成嚴重的水樣腹瀉綜合征。霍亂弧菌引起的主要病變是由嚴重脫水、臨床上可見的指紋皺紋、皮下組織和肌肉幹邑引起的。心髒，肝髒，脾髒和其他器官被看到收縮。内髒漿膜是啞光的。腸腔高度擴張，腸内充滿水樣液體，腸粘膜松動，但粘膜上皮完整，無潰瘍。膽囊充滿粘稠的膽汁。球狀和間質的毛細管擴張，腎髒的小管腫脹，退行性和壞死。其他器官也有出血，退化和其他變化。
二、檢驗過程
試驗參考标準為SN/T 1022-2010進出口食品霍亂弧菌檢測方法。本标準規定了進出口食品中霍亂弧菌的檢測方法，适用于食品中霍亂弧菌的檢測，以及動物飼料等食品生産加工地區環境樣品中的霍亂弧菌檢測。
霍亂弧菌檢測程式如圖1所示：
圖 1
1. 媒體識别和結果判斷
（1） TCBS 培養基
原理：蛋白質铌、酵母浸漬粉提供碳和氮源、維生素和生長因子，氯化鈉刺激弧菌生長，蔗糖是發酵糖，牛膽汁酸鈉，牛膽汁粉，硫酸鈉和铌酸鈉和高pH值抑制革蘭氏陽性菌群和大腸杆菌基團，硫酸鈉和檸檬酸鐵反應作為檢測硫化氫産生的名額， 溴香草酚藍和香草酚藍是pH訓示劑，瓊脂是培養基的凝結劑。
使用方法：稱量本品89g，煮沸溶于1000ml蒸餾水中，冷至45-50c，倒入無菌平盤中，備用。注意：不需要高壓滅菌器。
結果：霍亂弧菌在TCBS上呈圓形，表面光滑，黃色，直徑2mm~3mm，具體檢測結果如下：
圖2 非01 TCBS培養基生長結果霍亂弧菌
（2）青黴素瓊脂培養基
原理：蛋白钯、锱粉提供氮源、維生素、礦物質和生長因子，蔗糖提供碳源，氯化鈉用于滿足霍亂弧菌鹽生長的要求，同時形成高滲透壓，不利于其他細菌的生長，硫酸鈉能刺激弧菌生長，清中克氏陽性菌和一些革蘭氏陰性菌的存在可以抑制格黴素和鉀的存在 茴香和高pH值，萜烯鈉可以保護霍亂弧菌免受其他抗菌物質的侵害，霍亂弧菌對酸性環境敏感。是以，pH值促進其生長;瓊脂是培養基的凝固劑。
使用方法：取本品56.0g，加熱攪拌溶解于1000毫升蒸餾水中，冷至50°C左右，加入無菌1%山梨酸鉀溶液0.5毫升，攪拌均勻，倒入無菌平盤中備用。無需高壓滅菌器。
結果：霍亂弧菌在青黴素瓊脂培養基中微灰色、半透明、扁平微鼓脹，如長時間培養或室溫放置，菌落中心形成黑色金屬钯沉澱，具體檢測結果如下：
菌落略呈藍灰色，半透明，扁平且略呈凸起
延長培養時間後，菌落中心形成黑色金屬钯礦床
（3）氯化鈉三糖鐵瓊脂
原理：蛋白粉、牛肉蘸粉、酵母蘸粉提供碳氮源、維生素和礦物質;堿性是紅色的，因為有些細菌能分解含硫氨基酸，在媒體中産生硫化氫、硫化氫和鐵鹽反應，産生黑色鐵素體沉澱，氯化鈉含量較高，能促進弧菌的生長，瓊脂是培養基的凝固劑。
使用方法：稱量本品69.5g，加入1000ml蒸餾水，加熱煮沸，制成完全溶解，試管下，121°C高壓滅菌15分鐘，備用。
結果：霍亂弧菌反應至下體黃色、斜黃色，不産生硫化氫，不産生氣體，具體檢測結果如下：
（4）氯化鈉營養瓊脂
原理：蛋白質坩埚和蘸牛肉粉提供微生物生長所需的碳和氮源，維生素和生長因子;
使用方法：要求本産品36.0g，熱溶于1000毫升蒸餾水中，分成三角形瓶或試管，121°C高壓釜15min，備用。
結果：氯化鈉營養瓊脂培養液中霍亂弧菌在純化培養菌落後呈圓形，邊緣半透明中心不透明，直徑約3mm，具體試驗結果如下5：
2. 生化鑒定及結果判斷
（1） 革蘭氏染色
使用的試劑：Gram的染色液試劑盒。
原理：結晶紫原染和碘液體染色後，在細胞壁上形成不溶性結晶紫色和碘絡合物，革蘭氏陽性菌由于細胞壁厚，肽多糖網水準較高而交聯，當乙醇或丙酮脫色時由于水分的流失，網孔減少， 再加上其不含脂質，使結晶的紫色和碘絡合物能牢牢地留在壁内，使其仍呈紫色，而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜脂含量高、肽多糖層薄而交聯不良，遇到脫色劑後，脂肪基外膜迅速溶解， 薄而松散的肽多糖網不能阻擋結晶的紫和碘絡合物的溶解，是以脫色後通過乙醇仍然是無色的，然後通過沙黃等紅色染料重新染色，使革蘭氏陰性菌變紅。
結果：霍亂弧菌為革蘭氏陰性菌，弧形或彎曲，染色結果如圖6所示：
（2） 氧化酶試驗
使用的試劑：氧化酶試紙。
原理：氧化酶又稱細胞突緻氧化酶，是細胞皮質呼吸酶系統的最終呼吸酶，氧化酶首先使細胞色素c氧化，然後這種氧化細胞媒體c再氧化苯胺，産生顔色反應。用薄玻璃棒或一次性接種針頭選擇單個菌落，然後塗抹在試紙上。在30s内變成藍色或藍紫色是積極的，恒定的顔色是消極的。
結果：選擇在營養瓊脂上培養的單一菌落進行氧化酶檢測，霍亂弧菌氧化酶陽性，結果如圖7所示：
（3）生化鑒定條試驗
使用的試劑：青島海博HBI霍亂弧菌生化鑒定條（SN）。
試劑介紹：霍亂弧菌的生化鑒定。成分：ONPG，尿素酶，明膠，精氨酸雙水解酶湯，鳥嘌呤脫脂酶湯，賴氨酸脫脂酶湯，氨基酸脫脂酶對照，無鹽胰腺水，2%氯化鈉胰腺水，6%氯化鈉胰腺水，6%氯化鈉胰腺水，6%氯化鈉胰腺水8%氯化鈉胰腺水，10%氯化鈉胰腺水，靛藍基質，1%氯化鈉乳糖，1%氯化鈉纖維雙糖， 1%氯化鈉阿拉伯糖，1%氯化鈉蔗糖，1%氯化鈉，42°C生長試驗。（SN 标準）。
操作流程：取内2毫升無菌生理鹽水試管，用接種針從氯化鈉營養瓊脂平闆中取出部分菌落放入無菌生理鹽水中，仔細研磨制成0.5小麥渾濁度的均勻細菌懸浮液，取無污染生化鑒定條，每個孔加入100ul菌懸液， 其中固體和半固體生化管采用穿孔接種，需要将小鳥堿、精氨酸、賴氨酸和氨基酸控制到無菌石蠟覆寫的液體表面。接種疫苗後，做一個标記，蓋上蓋子，放入底部托盤中，放置36°C±1°C培養物（42°C生長設定42°C培養物）。培養結束後，記錄測試結果。具體測試結果如下：
霍亂弧菌非01生化鑒定結果表
<col>
生化項目
結果确定
生化形狀
斷續器
＋
黃色
8%氯化鈉蛋白水
﹣
不會增長
尿素酶
10%氯化鈉蛋白水
明膠
液
1%氯化鈉乙二醇
紅
鳥氨酸
紫色
1%氯化鈉乳糖
不變顔色
賴氨酸
1%氯化鈉纖維二糖
氨基酸控制
1%氯化鈉阿拉伯糖
精氨酸
1%氯化鈉蔗糖
無鹽蛋白水
增長變得多雲
靛藍矩陣
紅色戒指
2%氯化鈉蛋白水
42°C生長試驗
6%氯化鈉蛋白水
氧化酶
注意：。。。是積極的;- 負面
注：1.靛藍基質試驗過程中，培養結束後應加入2-4滴Kovacs的靛藍基質試劑，混合後4h内觀察結果，2.Birdine、精氨酸、賴氨酸和氨基酸控制應塗覆無菌液體石蠟。
三、結果總結
霍亂弧菌在TCBS上呈圓形，表面光滑，黃色，直徑2mm~3mm，微藍灰色，半透明，扁平，在青黴素的瓊脂培養基上微鼓鼓，如長時間培養或室溫放置，菌落中心形成黑色金屬钯反應，反應在氯化鈉三糖鐵的斜面上底部為黃色， 斜面上黃色，不産生硫化氫，不産生氣體，菌落在氯化鈉營養瓊脂培養基上淨化後呈圓形，邊緣為半透明中心不透明，直徑約3毫米;通過革蘭氏染色測試确定為革蘭氏陰性，彎曲或彎曲;氧化酶試紙上呈紫色，檢測結果呈陽性;在無鹽蛋白質水和2%氯化鈉蛋白質單甯水中生長;6%氯化鈉蛋白水，6%氯化鈉蛋白水，水，8%氯化鈉蛋白水生長呈陽性，10%氯化鈉蛋白在水中不生長;ONPG是積極的;尿素酶為陰性;明膠是陽性的;birdine，賴氨酸脫脂酶是陽性的;氨基酸控制和精氨酸為陰性;蔗糖、乙二醇為乳糖陽性，纖維雙糖和阿拉伯糖均呈陰性，靛藍基質試驗呈陽性，并在42°C培養箱中生長。除上述檢測外，霍亂弧菌檢測還可以可選血清信用型等相關檢測。