SRAP分子标记技术，对于华顶杜鹃的遗传多样性有什么影响？
前言：华顶杜鹃生于海拔700~1200m的针阔叶混交林中，株高1~4m左右，树皮呈斑块状纵裂，花期较长，花色艳丽，具有较好的观赏价值，不过华顶杜鹃种间关系松散，整体关联性差，种群存在着不同程度的衰退现象，该物种亟需保护。
相关序列扩增多态性（SRAP）是一种基于PCR的新型分子标记技术，以复性变温法为核心，利用特定引物扩增开放阅读框（ORF）。
相比简单序列重复区间（ISSR）、随机扩增DNA多态性（RAPD）、简单重复序列（SSR）等分子标记，SRAP具有共显性高、重复性好、操作简便等优点，被广泛应用于种质资源鉴定评价、基因定位克隆、遗传多样性分析等方面的研究。
近年来，华顶杜鹃相关研究主要集中在群落结构、种子萌发与育苗等方面，在分子层面的研究较少，本研究利用SRAP分子标记，对不同居群华顶杜鹃的遗传多样性进行分析。
采集华顶杜鹃不同植株的叶片，冲洗、晾干、研磨之后，采用十二烷基磺酸钠法（SDS法）提取华顶杜鹃叶片基因组DNA用于电泳检测。利用PCR反应体系，从140对引物中筛选重复性好、多态性高的组合，用于SRAP-PCR扩增。
随后进入循环，循环结束后，分别以“0”与“1”表示条带的缺失和存在，利用SRAP-PCR的统计结果计算居群水平和物种水平的遗传参数，再进行UPGMA聚类分析。
总共筛选到8个引物组合，利用这些引物扩增得到的条带清晰度高、稳定性好、多态性丰富，可用于后续的读带和统计分析。
利用8对引物共扩增出263个位点，其中多态性位点261个，多态位点百分率为99.24%，平均每对引物扩增出32.87个位点。
物种水平上，华顶杜鹃的H为0.2215，I为0.3579，而居群水平的PPB均值为36.96%，I与H的均值分别为0.1817和0.1199，数据低于物种水平。
各居群的遗传参数也存在较大的差异，KCS的遗传参数（Na、Ne、H、I）都大于其他居群，具有较高的遗传多样性。
各居群间遗传距离范围为0.1167~0.2173，平均遗传距离为0.1567。
其中KCS和CZ的遗传距离最大，为0.2173，遗传一致度最小，为0.8047，说明居群间存在较大的遗传差异，它们的关系较远。
DCJ与CZ的遗传距离最小，为0.1167，遗传相似系数最大，为0.8899，表明2个居群的遗传差异性最大。
遗传分化系数（Gst）和基因流（Nm）的计算结果表明，5个居群间的Gst为0.4596，即遗传变异中有45.96%来自于居群间，54.04%存在于居群内，Nm为0.5878，该值小于1，表明居群间的遗传交流少。
聚类分析结果显示，当遗传相似系数为0.31时，5个居群聚为2个不同的分支，第一支包括居群TGJ、KCS和TTS，另一支包括居群DCJ和CZ，表明DCJ、CZ与其他3个居群间的关系相对较远。
随着相似系数的升高，居群个体间的遗传关系更加明确，同一地理来源的样品聚为一组，居群之间没有任何交叉。
在遗传相似系数约为0.56时，TTS居群的10个样品被分为两支，TTS3单独聚于一支，说明TTS3与该居群内其他个体间存在一定的差异。
本研究也得到了类似的结果，在物种水平上，华顶杜鹃的PPB值高达99.24%，I值为0.3579，H值为0.2215，高于许多濒危的灌木物种，而居群水平上的遗传参数远小于物种水平，表明华顶杜鹃居群内个体的遗传变异水平相对较低。
植物种群的遗传变异主要受到种群大小、繁育系统、基因流等因素的影响，其中基因流的迁移可以防止种群分化，阻止种群内遗传变异的减少。
植物的基因交流需要依靠花粉、孢子等携带遗传物质的媒介，而华顶杜鹃的繁育系统为异交，可以通过种子或花粉的扩散进行居群间和居群内基因的交流。
结论：
综上，研究中华顶杜鹃居群间的遗传分化系数为0.4596，表明遗传变异大部分出现在居群内，其余发生在居群间。
当Nm＜1时，遗传漂变会导致种群间发生明显的遗传分化，华顶杜鹃Nm为0.5878，说明居群间发生了遗传漂变，它是居群间发生遗传分化的重要原因之一。
SRAP分子标记明确了华顶杜鹃的遗传多样性，为后续开展华顶杜鹃的保护和合理利用提供了依据。
