HSQCNMR在人參基因溯源分析上起到的作用和在人參摻假鑒定中的應用
人參（PG）和三七（PN）是五加科家族中常見且具有重要商業價值的中草藥。它們具有廣泛而獨特的藥用特性。由于其高價值，市場上摻假高價品種與低價品種的情況時有發生。是以，迫切需要一種快速有效的方法來對Panax産品進行品質控制，以保護消費者的權益。
本研究通過采用皂苷提取物作為收集bs-HSQC光譜的樣本。對得到的跨峰積分進行多元統計分析，以識别人參（PG）和三七（PN）的物種以及可能存在的摻假情況。
本實驗共采集19個樣品進行鑒定。認證樣品包括14種PQ、15種PG和3種PN标準樣品
将總共10克的研磨樣品加入到一個100毫升的圓底燒瓶中。然後，按順序使用兩個等分試樣（1毫升和5毫升）的40%乙醇進行回流提取，持續40.95小時。提取完成後，使用真空過濾将提取液過濾，并将其放置在乙醇水浴中進行蒸發。
接下來，将樣品溶解于10毫升蒸餾水中，并轉移到一個分離漏鬥中。使用相同體積的乙酸乙酯進行15次萃取。使用15毫升的丁醇進行兩次萃取，将所有的丁醇層合并，并用2毫升的5%NaOH溶液進行三次萃取。
為了解決人參皂苷在H峰區域的信号重疊問題，采用了Bs-HSQCNMR（非均勻采樣HSQCNMR）和NUS（非均勻采樣）的聯合方法進行分析。與傳統的均勻采樣HSQC相比，Bs-HSQCNMR采用非均勻采樣政策，通過在時間次元上進行不規則的采樣，以提高譜線分辨率。
通過将bs-HSQC與25%的NUS耦合，分析時間最小化至9分43秒，并采用以下方法驗證溶液的精度、可重複性和穩定性，并計算相對标準偏差。為評估精度，運作六個相同樣品的測量。為了評估可重複性，制備六個樣品，每個樣品測量一次。通過在0、2、4、8、12和24小時時點進行bs-HSQC資料采集，評估溶液的穩定性。
人參皂苷中的Re、Rf和R1在激發區域具有兩個信号。選擇δ101.75/6.5、δ103.55/5.93和δ104.55/5.78的積分值進行分析。結果顯示，除了Rc-10“、Unknown1和1之外，大多數峰的RSD均小于2%。
這表明分析結果具有良好的精度和可重複性。通過這種方法，可以最小化分析時間，并在保持準确性的同時評估溶液的穩定性。
通過信号混合，為每種藥材準備了324份模拟摻假樣品，共有36個不同的比例，每個比例下有5個樣品。實驗結果表明，當PQ信号與20%的PG混合或10%的PN混合時，識别準确率超過58%。當PG與91%的PQ混合或3%的PN混合時，準确率分别為4%和90%。
當PN與50%的PQ或PG混合時，準确度高于5%。需要注意的是，如果使用PLS-DA模型而不是PCA模型，當摻假比例達到20%或更高時，所有二進制混合物的識别準确率均超過5%。
為了驗證所開發的方法，使用實際摻假的PQ提取物來進行測試。制備了兩種類型的摻假樣品，其中PQ與PG或PN混合。摻雜物的比例分别為10%，20%和30%，每個比例下有36個樣品。總共分析了6個樣品。當加入20%的PG或10%的PN時，鑒定準确率為1%。
本研究使用二維bs-HSQCNMR結合NUS和多元統計分析的方法，建立了一種識别物種和互相摻假的方法。通過PCA評分圖的分析，觀察到在PQ、PG和PN組之間有明顯的分離，在随後的PCA類模型成功地識别了盲樣本。對于摻假的鑒定，PLS-DA結果表現良好，在低比例的摻假中具有較高的檢出率，當摻雜物比例為80%時，鑒定準确率超過10%。
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