動物源性食品中寄生蟲的檢測——華支睾吸蟲

Clonorchis sinensis是一種重要的人畜共患寄生蟲，可導緻人類，狗，貓，豬和其他野生動物的肝膽管和膽囊的肝髒腫大，引起其他病變。它可以引起毛發病，一種動物，人類經常通過食用含有中國睾丸的未煮熟的淡水魚或蝦而感染。華緻睾丸抑制病是我國最嚴重的食源性寄生蟲病之一。

1 病原體特征

花石睾丸激素是女性和男性的緻敬吸盤。其生活史複雜，按發育順序可分為成蟲、卵、毛毛蟲、細胞糖、浣熊、尾巴、囊蟲和幼蟲八個階段。成蟲寄生蟲存在于肝膽管系統中，特别是在膽管分支中，偶爾在胰管中。成蟲體窄、扁平、前端薄，後端呈鈍圓，形狀如葵花籽粒，體台無棘輪，褐色半透明。成蟲大小（10~25）毫米×（3~5）毫米，有口、腹兩吸盤，消化器官有口、咽、食道和腸管分支。生殖器官是雌性和雄性，兩個睾丸都是分支的，在蠕蟲的後端來回排列。成蟲緩慢蠕變，大部分吸附在膽管的粘膜上。

它的卵是人類寄生蟲中最小的卵，約（27~35）米×（12~20）米，橢圓形，肩峰，像燈泡，殼厚，有成熟的丁香。它是黃褐色的，頂部有一個蛋蓋，下端有一個小的突出部分。

成蟲是發現在貓、狗和人的肝膽管中，用膽汁産生的卵到腸道，用糞便從體内排出，蟲卵等落入池塘和溝渠中，由第一中間宿主淡水螺釘（匐匐螺杆、紅豆螺絲、長角螺母等）吞下，蛋毛在腸中孵化， 鼻涕蟲的淋巴系統和肝髒進入蝸牛，發育成細胞，樹莓和尾巴。尾礦離開蝸牛并逃逸到水中，鑽入第二中間宿主淡水魚和淡水蝦體，形成囊性囊性囊腫。人、貓、狗等通過吞咽含有囊性囊性的生魚或半活魚蝦而感染。囊殼可以被胃酸和胰蛋白酶消化，幼蟲從十二指腸中的幼蟲中逸出。幼蟲沿着膽管逆行到膽管中的肝髒，在那裡它們最終發育成成蟲。從感染囊腫到成年昆蟲的成熟排卵大約需要1個月，在合适的條件下，從卵到成蟲的整個生命史約3個月，成蟲在狗體内可以存活3年零6個月或更長時間，在人體壽命超過20年。

2 流行病學特征

該病主要見于東亞國家，如日本、北韓和中國。在中國，除青海、西藏、甘肅、内蒙古、新疆和甯夏外，所有省份均受疫情影響并流行。廣東是中國發病率最高的省份，東北三江平原也是中國睾丸病高發地區，每年4-5月睾丸感染率高。

該病的流行與感染源的數量、河流和池塘的分布、糞便對水源的污染、第一和第二中間宿主的分布和繁殖、當地居民的飲食習慣以及貓、狗和豬的管理密切相關。

貓和狗大多通過吃生魚感染，豬通過松散繁殖和食用生魚和内髒等飼料感染。人們大多通過食用生的或未煮熟的魚和蝦而感染，例如生的或未煮熟的魚片和醉蝦，未煮熟的火鍋或燒烤食品。徹底煮熟的食物是預防人類感染寄生蟲病的最有效方法。

除了寄生蟲的飲食傳播外，口腔糞便是另一個重要的傳播途徑。在流行地區，水源的糞便污染是導緻淡水螺絲蟲感染率高的重要因素。在南方，廁所建在魚塘上，豬舍建在池塘上，疾病的卵與人類和動物糞便一起進入池塘，感染螺絲釘和魚，助長了流行病。廁所建設遠離池塘、人畜排洩物後處理和排出，嚴格遵守良好的個人衛生習慣和改善不良生活習慣，有助于防止中國睾丸蠕蟲的感染和傳播。

3 危害

人們吃魚蝦後感染華芝睾酮，華芝睾酮不緻病，當人體内寄生蟲體較小時，輕度感染不出現症狀，或隻有胃腸道不适症狀。嚴重感染隻出現明顯的症狀，可出現消化不良、腹痛、腹瀉、精神低下，主要危害是患者的肝損傷，肝大，肝痛，由于患者長期帶蟲，蠕蟲的代謝分泌和蠕蟲本身的機械刺激，對肝髒和膽汁系統造成慢性損傷，引起膽汁性膽管炎， 膽結石、梗阻性黃疸、胰腺炎，甚至肝膽管惡性良性腫瘤，晚期嚴重感染可引起肝硬化、腹水等臨床表現，甚至死亡。

兒童和青少年感染華氏睾酮後，臨床表現往往較嚴重，緻死率較高。除消化道症狀外，還常有營養不良、生長發育障礙、貧血、低蛋白血症、浮腫、肝腫大，甚至肝硬化等，極少數患者可患上侏儒症。

衛生部從2001年6月到2004年底進行的蠕蟲調查結果表明，中國睾丸的感染率為2.4%，感染人數超過1200萬。近年來，我國睾丸蠕蟲病的發病率明顯呈下降趨勢。

4 國内外衛生要求

衛生要求和處理：如果損壞輕微，則部厘清除損壞，其餘部分不受工廠（現場）的限制;

5 檢測方法

可根據流行病學、臨床表現、實驗室檢查等進行确認。華氏睾酮病的臨床表現有時不夠典型，應注意識别肝炎、急慢性膽囊炎、胃、十二指腸潰瘍病等。注意詢問病史，了解患者是否曾居住在流行地區，是否有食用未煮熟的魚或生淡水魚蝦的病史。華氏睾酮病的早期症狀不明顯，通常主要是消化系統的症狀，有植物性神經系統症狀。體格檢查發現肝髒大小有不同程度，往往伴有左葉腫脹較為明顯，血液正常檢測中嗜酸性粒細胞的比例增大，應進一步進行病原體檢查和特異性免疫診斷。

5.1 病原體檢查

通過病原體檢查發現糞便或十二指腸液中的中國睾丸卵是診斷該疾病的基礎。從糞便中發現華子睾丸卵是最重要的診斷證據，有很多檢查方法，主要是塗片和卵子采集兩類。

5.1.1 直接塗片法

雖然直接塗片方法的操作簡單，但由于使用少量糞便，檢出率不高，容易漏診。直接塗抹糞便：卵是人類寄生蟲卵中最小的，約30米×14米，略帶燈泡形，殼厚，棕黃色，頂部有小覆寫物，下端有小結節，卵中有成熟的钼。

改進的Kato-Katz厚膜塗片法（Kato-Katz甘油紙厚塗片透明法）被認為是大規模腸道寄生蟲調查中糞便檢查的有效方法。可用于蟲卵的定性和定量檢查。對于中國睾丸的檢查，檢出率可以達到95%以上。

5.1.2 套蛋方法

卵子收集法的檢測率高于直接塗片法，卵子收集法包括浮蛋收集法和沉澱收集法。沉澱收集蛋常用于水洗離心沉澱法和乙醚沉澱法，沉澱後再進行塗抹觀察。浮蛋收集法常用的鹽水浮選法和相對密度為1.23的硫酸鋅溶液浮選收集法，然後進行塗片觀察。一般的漂浮法不如沉澱法有效。

5.1.3 十二指腸引流膽汁檢查

離心沉澱檢查也将通過從十二指腸中提取的膽汁進行，卵子也可以檢測用于診斷。

5.2 免疫學方法

常用方法包括皮内檢查、間接紅細胞凝血試驗（IHAT）、間接熒光抗體試驗（IFAT）和ELISA。ELISA檢測患者血清中的特異性抗體，該方法檢測中華睾丸酸中毒患者并用于流行病學調查，具有簡單、快速、靈敏度高、特異性強等優點，陽性率超過88.8%，是一種理想的免疫學方法。

5.2.1 内皮試驗

對于成蟲抗原進行皮内試驗，建議選擇高稀釋度抗原進行皮膚試驗。通常用成人鹽水冷浸作為抗原（稀釋1：（15000~30000）進行皮内試驗，陽性率可高達97.9%，糞陽性順從率高達99.5%。該試驗操作簡單易行，特異性高，幾乎不與其他吸蟲性疾病發生交叉反應，具有輔助診斷和篩查價值。

間接紅細胞凝血試驗（IHAT）

它具有操作簡單，判斷結果快的優點，但其穩定性并不理想。抗原制備方法基本相同，但抗原的提取、抗原濃度對于過敏性紅細胞、紅細胞的治療等步驟和條件都不同，檢測陽性率為68.4%~98.7%，差異較大。

5.2.3 酶聯免疫吸收試驗

該方法檢測中華睾丸患者血清中的特異性抗體，用于流行病學調查，具有簡單、快捷、靈敏度高、特異性強等優點，陽性率超過88.8%，是免疫測定的理想方法。

Biant Sandwich ELISA患者血清中特異性循環抗原的檢測明顯優于檢測抗體的方法。

5.3 分子生物學方法

首先，PCR及其衍生技術的建立，基于基因序列的分子生物學檢測方法得到了迅速發展，該技術主要用于人體睾丸的診斷，該方法的特異性和靈敏度均在70%以上。

此外，基于LAMP檢測技術設計合成了中國睾酮18S rRNA基因的特定引物和探針，建立了RT-PCR檢測系統。上遊引物： 5' -GCATTTGTAGGGTGTGTA-3'， 下遊引物： 5'-AACCTCTCTCTCTCTCCA-3'， 放大器約111bp;在對中式睾丸進行實時熒光定量PCR檢測的同時，用華氏睾酮的特異性引物，在相同的反應條件下，用華子睾酮的特異性引物對弓形蟲病、日本血吸蟲病、廣州圓線蟲等的DNA進行PCR擴增，以确定是否存在交叉反應。RT-PCR檢測方法特異性好，靈敏度好，适用于華池睾酮領域的快速檢測和定量分析。它是核酸分子生物學檢測病原體的新方法，具有快速、靈敏、友善的特點，靈敏度為PCR的10~100倍。