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探究菌群中的粘蛋白是如何通過裂解促進了大腸杆菌噬菌體的潛在功效粘蛋白是一種富含糖基的蛋白質,具有高度的糖基化程度,它通過

作者:孤寒江雪

探究菌群中的粘蛋白是如何通過裂解促進了大腸杆菌噬菌體的潛在功效

粘蛋白是一種富含糖基的蛋白質,具有高度的糖基化程度,它通過與細菌表面的多糖物質互相作用,發揮着粘附、黏性和保護的功能,本研究的目的是探究菌群中的粘蛋白通過裂解作用,對大腸杆菌噬菌體的潛在功效的影響。

初步研究結果表明,裂解粘蛋白可以降低大腸杆菌細菌的生物膜黏附能力,進而增強噬菌體與細菌的接觸和吸附,除此之外,裂解粘蛋白釋放的糖基化片段可以與細菌表面結構互相作用,破壞細菌生物膜的完整性,使噬菌體更容易進入細菌。

研究使用大腸杆菌菌株K803和兩種裂解性大腸杆菌作為捕食者T4和PhiX評估了噬菌體捕食後在不同條件下的細菌活力,并分析出細菌運動是噬菌體捕食功效的最強決定因素,然而,粘蛋白已被證明會阻礙細菌運動,這表明噬菌體捕食在腸道含粘蛋白的環境中可能會受到細菌運動喪失的不利影響。

為了首先評估粘蛋白濃度增加對K803運動的影響,研究使用了基于闆的運動測定,在對粘蛋白濃度增加的中央接種運動闆進行過夜孵育後,使用四唑的顯色副産物作為細菌代謝發生位置的讀數,可視化來自接種部位的細菌運動。

實驗研究的運動闆上紅色超出原始接種位點的距離的比較表明,粘蛋白濃度的增加降低了細菌運動性,正如從接種部位到最外層運動區域的測量所預期的那樣,通過将粘蛋白濃度增加到僅0.5%,細菌運動性降低了約20%,較高濃度的粘蛋白導緻更顯着的運動性降低,64%粘蛋白的遊動距離減少了約4%。

在每種測試條件下,運動闆内細菌擴增的圖像表明,即使在最高濃度的粘蛋白下細菌運動受到阻礙,噬菌體在低細菌:噬菌體比率下也有助于增加細菌傳播的阻礙,細菌隻能在測試的最低比例(1:0.01)下克服噬菌體效應,在含有T4和PhiX的平闆中都發生了突破性的細菌運動。

在這個最低的細菌:噬菌體比率下,無論存在哪種噬菌體,細菌傳播距離都接近于無噬菌體對照中發現的距離。

量化每種噬菌體在不同條件下捕食噬菌體水準的實驗,需要確定實驗條件中使用的粘蛋白濃度不會促進細菌生長,因為粘蛋白已被證明是非共生大腸杆菌的代謝底物,是以研究量化了孵育0小時後含粘蛋白樣品(5.4%-3%)與對照(單獨LB)中的細菌生長。

對于管内實驗設計涉及從 100 mL 樣品體積中接種 1 μL,其中 10 μL3細菌用于播種,由于從過夜培養物中稀釋種子細菌并在引入噬菌體之前30分鐘孵育,然後進行3小時的實驗孵育時間,是以實驗結束時的細菌樣品可能處于早期對數階段。

對照闆上的菌落計數與這一前提一緻,因為數量範圍為3×103至 5 × 103在實驗結束時與實驗開始時的100至200相比,為了證明粘蛋白在此時間範圍内不影響細菌生長,将粘蛋白中細菌生長的數值歸一化為對照,并繪制為倍數變化的函數,這些措施表明,測試的粘蛋白濃度并沒有系統地增強細菌生長與對照媒體的比較。

運動闆僅允許在噬菌體存在的情況下分析細菌傳播,而不是評估噬菌體捕食對細菌活力的影響,為了确定噬菌體捕食的結果作為粘蛋白濃度的函數,研究使用管内測定來評估噬菌體暴露後的細菌存活,方法是從每種測定中接種少量細菌生長。

研究将含噬菌體樣品的結果與等效的無噬菌體樣品進行比較,對生長闆上細菌菌落的觀察顯示,從含噬菌體樣品中提取的細菌中經常出現不同的菌落形态,平闆的簡單可視化顯示了樣品中條件之間的實質性差異,然而使用菌落計數軟體進行菌落形成機關(CFU)并不能反映這些差異,因為點狀菌落與大的健康菌落沒有差別。

結論:

研究表明,粘蛋白的裂解可以顯著促進大腸杆菌噬菌體的潛在功效,裂解粘蛋白能夠降低大腸杆菌細菌的生物膜黏附能力,增強噬菌體與細菌的接觸和吸附,糖基化片段的釋放破壞了細菌生物膜的完整性,使噬菌體更容易進入細菌,這種裂解作用提高了噬菌體與細菌之間的互相作用,增強了噬菌體的感染效率。

參考文獻:

莫妮卡·布爾傑,《噬菌體互相作用》

卡琳·克裡斯蒂安斯,《噬菌體療法:多重耐藥時代抗生素的替代品》

莎拉·德貝,《噬菌體多樣性、基因組學和系統發育》

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