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淡水動物園的收集和鑒定
淡水浮遊動物的采樣和鑒定
陳燦爛1，2，王文平1，2，楊軍1
1 中國科學院城市環境與健康重點實驗室，中國科學院城市環境研究所福建省生态生态學重點實驗室，水生态健康研究組，福建廈門;
：： 時事通訊作者電子郵件： [email protected]
摘要： 動物區是水生态系統的重要組成部分，淡水中常見的動物園包括原生動物、轉子、支角、腳等。本文以湖浮遊生物為例，介紹了内陸水域浮遊生物的采集、集中、固定、儲存和識别工作流程，可用于動物群落的定量分析。
關鍵詞： 動物平面， 浮遊生物網絡， 内陸水體， 采集， 識别
材料和試劑
1. 波昂試劑
2. 250 mL 樣品收集瓶
3. 5L樣品收集瓶
4. 60 mL 樣品儲存瓶
5. 清洗瓶子
6. 4-自封包
儀器和裝置
1. 集水器 （5 L）
2.25' 浮遊生物網 （孔徑 64 sm）
3. 25'小濾鏡（孔徑64 sm濾鏡）
4. 倒置顯微鏡
5. 解剖鏡
6. 計數盒 （0 .1 毫升， 1 毫升）
7. 移液槍 （0 .2 毫升， 1 毫升）
8. 計數器
9. 解剖針
實驗步驟
1. 取樣前的準備
1.1 示例工作站設定
根據研究目的，當水深小于3米時，很難形成熱分層現象，可以收集表層（0.5米）水體的樣品。在3-10米的深度，分别收集地表（0.5米）和下面的水體（沉積物表面以上1-2米）。當水深大于10米時，根據現場檢測到的水溫特征和溶解氧垂直剖面分布特征，一般收集至少3個水層的樣品，包括表面（0.5米），熱聚合物跳躍或氧氣跳躍層的水圈，溫度跳躍層或氧氣跳躍層（湖的下層， 但沉積物表面向上2米）。
1.2 樣品供應準備就緒
準備5L集水機2台，泵組1台（帶25L桶，水樣定量）進行水樣采集;2 2 x 浮遊生物網絡，250 mL 樣品收集瓶，用于過濾豐富的分支角，基座浮遊生物，5 L 樣品收集瓶，用于收集本地動物，輪蟲病樣品。
制備波昂試劑（1500 mL充滿苦酸，660 mL甲醛，139 mL冰醋酸）。
制備Rugo試劑（20克碘化鉀，10克碘，20毫升冰醋酸，固定容量至200毫升）。
1.3 預采樣檢查
取樣前，檢查集水器是否完好無損，如底部出水口堵塞、挂耳松動等。泵套件是否齊全，如管件、鋼絲磨損、滴答聲牽引繩、電池充電等;浮遊生物網絡是否完好無損，如接口是否破裂，是否有孔洞，交換機是否靈活。樣品瓶提前寫上樣品号，并标記采樣時間和取樣器。
2. 浮遊動物的采集和固定
2.1 原生動物和輪蟲病的定量樣本采集
本地動物和輪蟲個體體積小且數量豐富，可以使用5L集水器或泵直接收集水樣。在現場收集5L水樣作為原生動物和轉子樣品，并立即用Rugo試劑固定樣品。如果水體富營養化較嚴重，原生動物和轉子蠕蟲的密度高，可以适當降低水的回收率，如果水體中原生動物和轉子蠕蟲的密度較低，則可以适當增加水的回收率。
2.2 分支角和蛞蝓的定量樣品采集
1）定量：使用5L集水器或泵收集水樣。用水泵取樣需要在25 L桶中定量。分支和腳組的個體較大且數量較少，通常我們在儲液罐中收集每個樣品6 0 L水樣，作為樹枝和腳樣本進行過濾。如果水體富營養化較為嚴重，樹枝和豆莢的密度可适當降低水回收率，如果水體中樹枝和腳的密度較低，則可以适當增加水回收率。
2）過濾：将6 0L水樣用25 s浮遊生物網過濾，将樹枝和腳類物種濃縮并收集到浮遊生物網中。
3） 收集：将所有過濾過的豐富分支和腳類樣品轉移到250 mL樣品瓶中。
4）清洗網：用過濾水樣清洗浮遊生物網3次，将剩餘的樹枝和腳類一起收集到收集瓶中，以便以後對樹枝和腳進行定量分析。
2.3 動物園計劃的定性樣本收集
進行了多次拖網捕撈，深度為25-浮遊生物網絡透明度的3倍，并将動物園樣本收集到250 mL收集瓶中，訓示定性樣品，收集時間，地點，收集者，樣品編号。
2.4 示例修複
取樣後立即将波昂試劑固定分支和腳樣品加入現場250mL收集瓶中，終濃度為5%。将Rugo試劑樣品加入5L收集瓶中以固定本地動物和輪蟲病，最終固定劑濃度為1.5%。
3. 祖普拉菲頂級藥物的濃縮和儲存
3.1 原生動物和轉子樣品的再富集
1）将5L收集瓶樣品置于靜态沉澱超過48小時，使用虹吸管緩慢吸出液體。
2）虹吸的流速和流速應放寬，沉澱和虹吸過程不應晃動，如攪拌底部應重新沉澱。
3）當吸收1/3的澄清液時，流量應逐漸減慢（或轉移到500 mL樣品瓶中，然後重新濃縮超過48小時），最終的濃縮水樣品（含有沉澱物）約為20-25 mL，置于樣品儲存瓶（60 mL）中。
4）最後，用少量吸出上層液體沖洗沉澱器3次，并将其倒入樣品儲存瓶中，固定容量為30 mL。如果樣品含有超過30毫升的水，可以再放置24小時，然後再吸收多餘的水（上層液體）。
3.2 重新濃縮角蛋白和足部樣品
使用由 15 mL 離心管制成的 64 m 過濾器進一步濃縮分支和腳類。
1）将固定的分支和腳樣品倒入2 50 mL收集瓶中，并将樣品收集瓶沖洗3次。
2）在離心管開口處伸入樣品儲存瓶（60 mL），并用洗滌瓶沖洗過濾器。
3）反複清洗瓶子3次過濾，清洗過程中連續旋轉過濾器，確定所有分支和污塊進入樣品儲存瓶中。
4）再次檢查數量，将波昂試劑加入樣品儲存瓶中，固定，最終濃度為5%。
3.3 儲存唑啉樣
1）樣品儲存瓶（60毫升）蓋上蓋子後，放入4個包裝袋中，密封，編号。
2）按抽樣編号的順序放入新鮮包裝盒中。
3）放入儲存盒以清潔盒子。
4）按順序将整理盒放在樣品架上。
5）制作樣品表，包括樣品編号，采樣時間，采樣地點，經緯度，采樣水深，水體類型，樣品名稱，存儲位置，記錄儀，檢查員等資訊。
4. Zooplaphytop鑒定和計數
4.1 祖氏菌識别
1）準備顯微鏡，解剖鏡，計數器，解剖針，移液槍（帶0.2 mL頭或1 mL頭，預先切斷尖端以擴大槍口）和計數盒（0.1 mL和1 mL）。
2）參考浮遊動物分類資料進行物種鑒定，要求盡可能識别物種或屬。
3）優勢種和常見種必須對物種進行鑒定，對于難以識别的種種，需要在解剖鏡或逆向顯微鏡下借助解剖針進行進一步鑒定，并對關鍵形态特征拍照，向同行專家交換意見。
4.2 祖普拉托普計數
固定樣品将計入zoopla浮選，實驗記錄應記錄采樣數量，采樣量，固定體積和計數量。
1） 完全搖動樣品後，使用 1 mL 移液槍将 1 mL 支部和足部樣品吸收到 1 mL 計數盒中。使用0.2 mL移液槍将0.1 mL原生動物和轉子的樣品抽取到0.1 mL計數盒中。
2）在顯微鏡或解剖環境下觀察樣本，識别計數并記錄類型，通常每個樣本至少識别300個人，以確定社群資料分析的品質。
3）按計算機關水量的遊牧場數量
在公式中：
N表示1L水樣（個體/L）中動物成形術的數量
V 表示樣品的體積 （L）
VS表示濃縮後樣品的體積（mL）
VO 表示計數樣品體積 （mL）
n 表示微觀世界獲得的個體數 （1）
4.3 浮遊生物量計算
采用體積法，可以将每個遊動物近似為幾何三維形狀，根據體積公式估計生物體積，假設遊動物的密度為1 g/cm3，計算出遊動物的生物量。體積公式參考了張宗軒和黃先飛（1991）對相應物種30個個體的長、寬、高資料，利用該公式得到濕重生物量。
統計和驗證
對每個樣本的浮遊生物資料進行整理，制作物種豐度和生物量資料表，并要求實驗室人員核對整理的資料，如果發現有疑問，應立即對動物飛機樣本進行重新鑒定，計數和處理。形成最終表單，并在确認正确後列印儲存的資料。
謝謝
得益于國家自然科學基金項目（31370471、31672312、91851104）和福建省自然科學基金項目（2019J02016）。
引用
1. 席立紅， 李慧明， 林秋琪， 韓伯平.（2015） 熱帶營養豐富的水庫開放水域動植物群落結構及季節變化——以廣東大沙河水庫為例。湖泊科學， 27（6）： 1049-1058.
2. 沈偉芬， 張宗相關， 易毅時刻， 顧滿如， 石鑫， 魏寅新.（1990） 微生物監測技術.北京： 中國建築工業出版社.
3. 張宗相關， 黃向飛.（1991） 淡水浮遊生物研究方法。北京： 科學出版社.
4.Sommer， U.， Adrian， R.， Domis L. D. S.， R.， J.， Gaedke， U.， Ibelings， B.， Jeppesen， E.， Lurling， M.， Molinero， J.C. and Mooij， W.M. （2012） Beyond Plan Andon Ecology Group PEG模型：驅動浮遊生物演替的機制。阿努。修訂版 Ecol. Syst. 43： 429–448.
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