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淡水动物园的收集和鉴定
淡水浮游动物的采样和鉴定
陈灿烂1，2，王文平1，2，杨军1
1 中国科学院城市环境与健康重点实验室，中国科学院城市环境研究所福建省生态生态学重点实验室，水生态健康研究组，福建厦门;
：： 时事通讯作者电子邮件： [email protected]
摘要： 动物区是水生态系统的重要组成部分，淡水中常见的动物园包括原生动物、转子、支角、脚等。本文以湖浮游生物为例，介绍了内陆水域浮游生物的采集、集中、固定、保存和识别工作流程，可用于动物群落的定量分析。
关键词： 动物平面， 浮游生物网络， 内陆水体， 采集， 识别
材料和试剂
1. 波恩试剂
2. 250 mL 样品收集瓶
3. 5L样品收集瓶
4. 60 mL 样品储存瓶
5. 清洗瓶子
6. 4-自封包
仪器和设备
1. 集水器 （5 L）
2.25' 浮游生物网 （孔径 64 sm）
3. 25'小滤镜（孔径64 sm滤镜）
4. 倒置显微镜
5. 解剖镜
6. 计数盒 （0 .1 毫升， 1 毫升）
7. 移液枪 （0 .2 毫升， 1 毫升）
8. 计数器
9. 解剖针
实验步骤
1. 取样前的准备
1.1 示例工作站设置
根据研究目的，当水深小于3米时，很难形成热分层现象，可以收集表层（0.5米）水体的样品。在3-10米的深度，分别收集地表（0.5米）和下面的水体（沉积物表面以上1-2米）。当水深大于10米时，根据现场检测到的水温特征和溶解氧垂直剖面分布特征，一般收集至少3个水层的样品，包括表面（0.5米），热聚合物跳跃或氧气跳跃层的水圈，温度跳跃层或氧气跳跃层（湖的下层， 但沉积物表面向上2米）。
1.2 样品供应准备就绪
准备5L集水机2台，泵组1台（带25L桶，水样定量）进行水样采集;2 2 x 浮游生物网络，250 mL 样品收集瓶，用于过滤丰富的分支角，基座浮游生物，5 L 样品收集瓶，用于收集本地动物，轮虫病样品。
制备波恩试剂（1500 mL充满苦酸，660 mL甲醛，139 mL冰醋酸）。
制备Rugo试剂（20克碘化钾，10克碘，20毫升冰醋酸，固定容量至200毫升）。
1.3 预采样检查
取样前，检查集水器是否完好无损，如底部出水口堵塞、挂耳松动等。泵套件是否齐全，如管件、钢丝磨损、滴答声牵引绳、电池充电等;浮游生物网络是否完好无损，如接口是否破裂，是否有孔洞，交换机是否灵活。样品瓶提前写上样品号，并标记采样时间和取样器。
2. 浮游动物的采集和固定
2.1 原生动物和轮虫病的定量样本采集
本地动物和轮虫个体体积小且数量丰富，可以使用5L集水器或泵直接收集水样。在现场收集5L水样作为原生动物和转子样品，并立即用Rugo试剂固定样品。如果水体富营养化较严重，原生动物和转子蠕虫的密度高，可以适当降低水的回收率，如果水体中原生动物和转子蠕虫的密度较低，则可以适当增加水的回收率。
2.2 分支角和蛞蝓的定量样品采集
1）定量：使用5L集水器或泵收集水样。用水泵取样需要在25 L桶中定量。分支和脚组的个体较大且数量较少，通常我们在储液罐中收集每个样品6 0 L水样，作为树枝和脚样本进行过滤。如果水体富营养化较为严重，树枝和豆荚的密度可适当降低水回收率，如果水体中树枝和脚的密度较低，则可以适当增加水回收率。
2）过滤：将6 0L水样用25 s浮游生物网过滤，将树枝和脚类物种浓缩并收集到浮游生物网中。
3） 收集：将所有过滤过的丰富分支和脚类样品转移到250 mL样品瓶中。
4）清洗网：用过滤水样清洗浮游生物网3次，将剩余的树枝和脚类一起收集到收集瓶中，以便以后对树枝和脚进行定量分析。
2.3 动物园计划的定性样本收集
进行了多次拖网捕捞，深度为25-浮游生物网络透明度的3倍，并将动物园样本收集到250 mL收集瓶中，指示定性样品，收集时间，地点，收集者，样品编号。
2.4 示例修复
取样后立即将波恩试剂固定分支和脚样品加入现场250mL收集瓶中，终浓度为5%。将Rugo试剂样品加入5L收集瓶中以固定本地动物和轮虫病，最终固定剂浓度为1.5%。
3. 祖普拉菲顶级药物的浓缩和保存
3.1 原生动物和转子样品的再富集
1）将5L收集瓶样品置于静态沉淀超过48小时，使用虹吸管缓慢吸出液体。
2）虹吸的流速和流速应放宽，沉淀和虹吸过程不应晃动，如搅拌底部应重新沉淀。
3）当吸收1/3的澄清液时，流量应逐渐减慢（或转移到500 mL样品瓶中，然后重新浓缩超过48小时），最终的浓缩水样品（含有沉淀物）约为20-25 mL，置于样品储存瓶（60 mL）中。
4）最后，用少量吸出上层液体冲洗沉淀器3次，并将其倒入样品储存瓶中，固定容量为30 mL。如果样品含有超过30毫升的水，可以再放置24小时，然后再吸收多余的水（上层液体）。
3.2 重新浓缩角蛋白和足部样品
使用由 15 mL 离心管制成的 64 m 过滤器进一步浓缩分支和脚类。
1）将固定的分支和脚样品倒入2 50 mL收集瓶中，并将样品收集瓶冲洗3次。
2）在离心管开口处伸入样品储存瓶（60 mL），并用洗涤瓶冲洗过滤器。
3）反复清洗瓶子3次过滤，清洗过程中连续旋转过滤器，确保所有分支和污块进入样品储存瓶中。
4）再次检查数量，将波恩试剂加入样品储存瓶中，固定，最终浓度为5%。
3.3 储存唑啉样
1）样品储存瓶（60毫升）盖上盖子后，放入4个包装袋中，密封，编号。
2）按抽样编号的顺序放入新鲜包装盒中。
3）放入保存盒以清洁盒子。
4）按顺序将整理盒放在样品架上。
5）制作样品表，包括样品编号，采样时间，采样地点，经纬度，采样水深，水体类型，样品名称，存储位置，记录仪，检查员等信息。
4. Zooplaphytop鉴定和计数
4.1 祖氏菌识别
1）准备显微镜，解剖镜，计数器，解剖针，移液枪（带0.2 mL头或1 mL头，预先切断尖端以扩大枪口）和计数盒（0.1 mL和1 mL）。
2）参考浮游动物分类数据进行物种鉴定，要求尽可能识别物种或属。
3）优势种和常见种必须对物种进行鉴定，对于难以识别的种种，需要在解剖镜或逆向显微镜下借助解剖针进行进一步鉴定，并对关键形态特征拍照，向同行专家交换意见。
4.2 祖普拉托普计数
固定样品将计入zoopla浮选，实验记录应记录采样数量，采样量，固定体积和计数量。
1） 完全摇动样品后，使用 1 mL 移液枪将 1 mL 支部和足部样品吸收到 1 mL 计数盒中。使用0.2 mL移液枪将0.1 mL原生动物和转子的样品抽取到0.1 mL计数盒中。
2）在显微镜或解剖环境下观察样本，识别计数并记录类型，通常每个样本至少识别300个人，以确保社区数据分析的质量。
3）按计算单位水量的游牧场数量
在公式中：
N表示1L水样（个体/L）中动物成形术的数量
V 表示样品的体积 （L）
VS表示浓缩后样品的体积（mL）
VO 表示计数样品体积 （mL）
n 表示微观世界获得的个体数 （1）
4.3 浮游生物量计算
采用体积法，可以将每个游动物近似为几何三维形状，根据体积公式估计生物体积，假设游动物的密度为1 g/cm3，计算出游动物的生物量。体积公式参考了张宗轩和黄先飞（1991）对相应物种30个个体的长、宽、高数据，利用该公式得到湿重生物量。
统计和验证
对每个样本的浮游生物数据进行整理，制作物种丰度和生物量数据表，并要求实验室人员核对整理的数据，如果发现有疑问，应立即对动物飞机样本进行重新鉴定，计数和处理。形成最终表单，并在确认正确后打印保存的数据。
谢谢
得益于国家自然科学基金项目（31370471、31672312、91851104）和福建省自然科学基金项目（2019J02016）。
引用
1. 席立红， 李慧明， 林秋琪， 韩伯平.（2015） 热带营养丰富的水库开放水域动植物群落结构及季节变化——以广东大沙河水库为例。湖泊科学， 27（6）： 1049-1058.
2. 沈伟芬， 张宗相关， 易毅时刻， 顾满如， 石鑫， 魏寅新.（1990） 微生物监测技术.北京： 中国建筑工业出版社.
3. 张宗相关， 黄向飞.（1991） 淡水浮游生物研究方法。北京： 科学出版社.
4.Sommer， U.， Adrian， R.， Domis L. D. S.， R.， J.， Gaedke， U.， Ibelings， B.， Jeppesen， E.， Lurling， M.， Molinero， J.C. and Mooij， W.M. （2012） Beyond Plan Andon Ecology Group PEG模型：驱动浮游生物演替的机制。阿努。修订版 Ecol. Syst. 43： 429–448.
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