《猫和老鼠》的故事情节围绕着一对普通的家猫，汤姆和老鼠杰瑞展开，他们有强烈的愿望，想要继续试图抓住住在房间里的老鼠杰瑞，并不断试图赶走讨厌的房客。虽然他总是失败，但汤姆在追逐中比抓住杰瑞更有趣。同时，汤姆经常使用暴力工具或陷阱，如斧头，锤子，炸药，鞭炮等对付杰瑞。但杰瑞非常聪明，汤姆的伎俩时不时适得其反，让汤姆自己拿水果。在这部动画中，没有动物世界的欺凌残忍，只有两个邻居之间的日常琐事和冲突。
汤姆（猫）总是以机会主义闪耀，低下腰，等待机会攻击杰瑞。在漫画中，它总是有强烈的欲望，想用它抓住客厅，却很难抓住老鼠杰瑞。但它总是失败。事实上，追逐远比抓住杰瑞有趣得多，即使他偶尔会抓住杰瑞，也不知道该怎么处理杰瑞，也许是因为他们在不知不觉中成为彼此生活中不可或缺的一部分。
杰瑞（老鼠）
总是用挑衅的眼神看着镜头，经常在休闲时和汤姆一起玩。因为杰瑞·古林太奇怪了，他经常能成功地戏弄汤姆，让他成为轶事，但有时他会被汤姆戏弄，有时也会享受汤姆对他的关心，让它动起来。