河南省黄河市急性腐鲤综合防治技术研究
杨雪兵等
一. 序言
黄河鲤鱼作为河南省水产养殖的主要品种，养殖区集中在洛阳、焦炭、新乡、郑州、开封、商丘等黄河沿岸地区，水产养殖总产量居全国第一，单产居全国第一，在促进养殖户增收、拉动当地经济、 对保障城乡人民"篮子"供给起到了重要作用。然而，在鲤鱼养殖过程中，受经济效益的带动，盲目追求单一生产，养殖环境日益恶化，造成多种病害，成为鲤鱼产业绿色健康发展的瓶颈。从本世纪初开始，每年的5-6月和9月-10月成为鲤鱼急性佝偻病的爆发期，鲤鱼在鱼塘的发病率是急性死亡人数较多，并将迅速蔓延到周边其他鱼塘。多年爆发的鲤鱼腐烂病害，给鲤鱼养殖业和整个产业链造成了重大损失。
为确定鲤鱼急性佝偻病病因，有针对性地制定疫情防控措施，河南省水产技术推广站联合科研院所和高校组建了项目组，制定了详细的技术路线和实施方案，开展了流行病学调查、病原菌检测、药物敏感性检测等相关基础工作， 理清病因，制定了鲤鱼急性腐病防治技术方案和操作规程，并应用于生产实践，并取得了良好的效果。对促进鲤科急性腐病综合防治示范具有指导意义，对促进水产品绿色健康养殖起到了一定的作用。
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黄河金生态鲤鱼（蒸或红烧）（500克/条） ¥59.90 买
流行病学调查和分析
（一）调查的内容和方法
调查主要利用实地调查和问卷调查，涵盖池塘、幼苗和养殖模式的状况。
（b） 调查结果和分析
沿河南黄河段从上到下依次选择三门峡市灵宝市、洛阳市吉利区、洛阳市孟津县、珠柰市孟州市、株洲市武夷县、郑州市濮阳市、郑州市中某县、新乡市、元阳县、新乡市延津县、开封市香福区、开封市锦明区、 商丘市梁园、商丘市等
1. 鲤鱼腐烂病、寄生虫病与池塘状况的关系
结果表明，不同形式的进水和引流与疾病症状的关系是：与外界的水交换越多，越容易发生急性佝偻病，与外界的水交换越少，越容易患寄生虫病。不同水源与发病率的关系如下：在调查的4个水源中，沟渠水发生率为100%，河水发生率为66.7%，地下水和河水发生率为40%，地下水发生率为34%，因此应采取沟渠水作为水源的池塘的重点防控。
鲤鱼腐烂病与池塘淤积深度的关系是：淤泥越深，淤泥清除间隔越长，越容易发生急性佝偻病。寄生虫的发病率是：通常泥浆越深，发病率越高。
2. 鲤鱼腐烂病害与寄生虫病的关系及苗源和放养密度
结果表明，苗源与鲤鱼腐烂病害概率的关系为：天津幼苗>武汉苗>河南省自育苗>，无锡苗>幼苗。发生寄生虫病的概率为：河南省苗苗>>天津幼苗。
鲤鱼腐烂和寄生虫病的发病概率与放养密度成正比，放养密度越大，发生腐烂佝偻病和寄生虫病的概率越大。
（3）水产养殖用水的环境测定与分析
1. 养殖水环境水化学指标
常规测定病池和正常池的溶解氧、pH值、氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、COD、碱度等指标。结果表明，高pH值和低碱度是病害原因，正常和病池COD值差异无统计学意义。
2. 浮游植物测定养殖水环境
根据内陆水域浮游生物调查方法，对病池内浮游植物进行了定性和定量对比分析。结果表明，鲤鱼急性腐殖池中浮游植物的优势种类为绿藻闸囊藻、网状藻类、裸藻门裸藻和硅藻门突变直链藻类。
3.养殖水环境菌落的测定
测定发病池和健康池中菌落、大肠杆菌、乳酸菌和弧菌总数，进行比较分析。结果表明，大肠杆菌、乳酸菌和弧菌菌落数量较高，平均菌落数为17.1×10 6 cfu/L，正常池塘平均菌落数为8.5×10 6 cfu/L，弧菌数量较多，中间为其他菌落。当池塘中菌落总数达到15×10 6 cfu/L或大肠杆菌数量达到9×10 6 cfu/L时，重点应放在积极预防和控制疾病上。
三、病原体分离、鉴定和药物敏感性测试
（1） 病毒检测
1. 材料和方法
将所得鱼的鳃、肾脏、肝脏、脾脏、脑和其他组织混合并研磨成样品，加上199个含有10%血清，-80°C的细胞培养物用于储存以进行测试。从样品中提取核酸，用于CEV嵌套PCR、CEV实时荧光定量PCR和KHV嵌套PCR实验测试。嵌套PCR产物的电泳分析和测序。然后，该序列是同源的，并且是遗传进化的。
2. 结果
在病鲤鱼中检测KHV病毒核酸序列，对28份CEV阳性样本进行测序，对25株P4a基因进行基因改造，在CEV P4a 433 bp基因的基础上进行分析。结果表明，23个CEV菌株属于GIIA基因型，2个菌株属于GIIb基因型。基因型与宿主物种的关系是，GIIa基因型CEV菌株感染锦鲤和食用鲤鱼，而GIIb基因型CEV菌株仅感染食用鲤鱼。CEV阳性样本的基因序列分析有助于最终确认诊断结果和致病基因型的分化。
（2）病原体检测和药物敏感性测试
本实验利用形态学、生理学、生化学和分子生物学方法，对项目所在池塘中的病鲤鱼和健康鲤鱼进行分离鉴定，对分离出的细菌和抗菌药物进行敏感性试验。
1. 样品和药品
从2016年到2018年，在鱼病高发季节（4月至10月），对项目所在养殖区的鲤鱼进行了隔离、鉴定和药物敏感性测试。
试验中使用的抗生素有：硫酸新霉素、伊诺沙星、甲基苯丙胺、氟苯、磺胺甲唑、甲基苯丙胺、磺胺、盐酸多西他赛等。
2. 实验结果
2016年至2018年，在项目所在池塘共分离出52株致病菌株，主要为维氏气体单核细胞菌、亲水性单核细胞细菌、轻度气体单核细胞细菌和豚鼠气体单核细胞细菌，其中Vetsin气体单核细胞细菌45株，亲水性单核细胞菌3株，轻度气体单核细胞菌2株。
药物敏感性试验结果显示，甲氧辛和磺胺三年来一直处于较高水平的耐药性，而磺胺甲唑在2016年和2017年的耐药性水平较高，2018年有所下降。氟贝尼考、多西他赛和硫酸新霉素耐药水平正在上升。
3. 分析和讨论
（1）病原菌对病鱼的影响
本试验从项目现场的病鱼中分离出45株Vesten气体单核细胞菌、3株嗜水性气体单核细胞细菌、2株轻度气体单核细胞细菌和2株豚鼠气单核细胞细菌，这些菌株是水产养殖中的主要潜在致病菌，对项目区水产养殖构成较大威胁。同时，还表明，兽医和其他运动气体单核细胞细菌是该项目所在鱼类疾病的主要原因之一。
（2）药敏试验结果对生产具有指导意义
本研究通过从项目所在鱼塘分离出的52种水产养殖致病菌监测药物敏感性，将每次药物敏感性实验的结果反馈给养殖户，引导他们科学准确地使用药物，避免了药物滥用对水产品安全的风险和隐患。根据连续定点监测，不仅对项目所在地的病原菌类型，而且对国家标准捕捞药物的细菌耐药性规律的改变规律，为鲤鱼急性佝偻病的防治提供了数据支持。
（三） 寄生虫检测
1. 材料和方法
其中一个项目地点是阜阳市，这是一个相对较大且集中的鲤鱼养殖区。对病鱼的当地鲤鱼急性腐烂病进行体表寄生虫检查、寄生虫试验和肠道寄生虫检查，现场对采集到的病害材料进行检测。
鲤鱼急性腐烂病是6月和9月的病害高峰期，水温在20C~30C之间，也是孢子病盛行的季节。4月和8月，对监测鱼塘的镜面检查显示，没有大量的孢子。在6月和9月，当鱼塘中监测鲤鱼的鳃充满大量孢子时，鱼类开始经历急性佝偻病。
孢子病是由鱼类孢子寄生虫引起的疾病。由于孢子形式简单，分布广泛，一旦发病，传染性高，死亡率高。据大量现场监测结果可以认为，在养殖过程中，由于投入了大量的饲料和鱼药，使大量藻类死亡，溶解氧下降，导致水质环境恶化，特别是6月和9月水温达到20°C~30°C， 当鱼一旦感染病毒性疾病或细菌性疾病时，鱼的抵抗力下降，如果鱼鳃上有大量的孢子，就会造成鱼呼吸衰竭和死亡。
四. 结论和讨论
（一） 结论
1. 主要病原体
病毒病原体：主要病原体是鲤鱼浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒。
细菌病原体：继发性病原体主要是兽医细菌、亲水性单核细胞细菌、轻度气体单核细胞增多症和豚鼠气体单核细胞细菌。
寄生虫病原体：临床试验发现，三分之一的鲤鱼检测到大量的孢子。
2. 发病机制
急性腐烂病的主要原因是鲤鱼浮肿和锦鲤疱疹病，鱼感染，当适宜的水温（23°C~28°C）时，病毒迅速扩张增大，对鲤鱼的组织器官和免疫系统造成极大的损害，此时，维氏气体单核细胞细菌和渴水性单核细胞增多症等细菌病原菌趁着侵袭， 繁殖和生长，引起疾病和死鱼，温度持续时间越长，疾病爆发的可能性越大。病毒的潜伏期一般为14d，鱼病和症状在死亡开始后24h~48h，2d~4d的死亡率可迅速达到80%~100%。暴发后，幸存的鱼类成为该病的携带者，将病毒传播给其他健康鱼类。经过一段时间水温高于28°C，低于23°C，受感染鱼类的自身免疫系统和组织器官得到修复，其抗病能力增强。因此，当水温高于30°C且低于18°C时，通常不会引起疾病的大爆发。
（二） 讨论
1. 池塘设施及管理措施
不同进水排水方式引起的鲤鱼急性腐烂病和寄生虫病的概率表明，不同池塘应采用科学合理的换水方式。专注于控制使用沟渠水作为水源的池塘可以显着降低急性佝偻病的发病率。池塘底泥不宜太深，要定期清理池塘，以降低病害发生概率。
2.水体物理化学因素
水体中水温、pH值、总碱度等各种理化因素的变化，会增强鱼类的应激反应，导致鱼类免疫力下降，也可能为病原生物的入侵和扩增提供条件，从而引发暴发。因此，在池塘管理过程中，应尽量保持水的理化因子相对稳定。
3. 营养
目前，市场上销售的大部分饲料蛋白质含量都在35%以上，对于鲤鱼来说，它的营养水平已经很高了，因此，鱼生长迅速，骨骼和肌肉的形成非常快。但是，由于生物体有自己的生长规律，其他微量物质，特别是一些活性成分缺乏功能细胞，可导致部分鱼类器官和免疫系统不能全部同步产生。如果一些功能性组织，特别是那些具有免疫作用的组织，稍微晚一些产生，就会造成短期的免疫力缺乏，此时应激因子的刺激很容易导致病原微生物的感染。
4. 生物因素
浮游植物的组成和生物量对鲤鱼急性佝偻病的影响不明显，但菌落的组成和数量与发病率密切相关。确定菌落总数、乳酸菌、弧菌和大肠杆菌，池塘菌落总数达到15×10 6 cfu/L或9×10 6 cfu/L应注意并积极防控疫情。
5. 病因分析
综上所述，鲤鱼急性腐烂病的病因是多种复合、叠加的，主要针对以下几个方面。
一是种子降解因素的影响。由于鲤鱼养殖方法简单，养殖者大多从自己的鱼塘选择个体较大的二龄鱼进行亲鱼养殖，经过代际繁殖，幼苗质量比较差，导致鲤鱼生长特性，抗病能力逐年下降。一旦繁殖环境发生剧烈变化，就很容易对疾病进行分组，严重病例爆炸性死亡。其次，高营养饲料因子的影响。因为鲤鱼生长过快，内消化器官、免疫器官生长不同步或滞后，代谢负担过重，导致免疫力下降，一旦繁殖环境发生剧烈变化，也容易引起大规模发病导致死亡。
第三，水质的影响。在高密度养殖的情况下，残留饵料、粪便和代谢物沉积在池塘底部，造成池塘底部老化，加上长期淤积不清，导致氨氮、亚硝酸盐超标、pH值、总碱度失衡、总菌落、有害菌数量明显增加。当天气炎热时，突然倾盆大雨，水体发生强对流，养殖水域的生态平衡被破坏，这将导致鱼病的发作，然后出现爆炸性死亡。
此外，破坏鱼类免疫系统的主要病毒是鲤鱼浮肿病毒，引起鳃腐烂的主要病原体是Vetsic细菌。此外，引起暴发疾病的致病菌有亲水性单核细胞菌、轻度气体单核细胞杆菌和豚鼠气单核细胞细菌。鲤鱼急性佝偻病不是由一个原因引起的，应该是由两个或两个以上原因引起的，因此，需要综合预防和治疗。
（3）全面的预防和控制措施
1. 坚持六大原则
（1）选择优质饲料;（2）选择优良品种养殖场生产的鱼种或鱼苗;（3）使用正规厂家的鱼药;（4）鲭鱼配比合理（3：1）;(5）彻底清理池塘;（6）放养密度合理，每亩主鱼不超过2000条。
2. 遵循五个要求
（1）水位保持在1米至;（2）5月至10月，每个月排除池塘底部四分之一的水;（3）每天补充的水不超过5%;（4）鱼种规格为150g前的3%~4%，然后逐渐降低到2%~3%;(5）水体预补磷晚碳。
3. 落实三包
（一）从购苗开始，对苗木进行检疫，定期对养殖场进行病害监测;
（2）严格管理养殖水源，对养殖尾水进行无害处理，（3）帮助养殖户建立水产养殖产量记录，定期与渔民就健康的鲤鱼养殖技术进行互动。