牛源性产维罗细胞毒素大肠杆菌 O157：H7 特定亚型的犊牛实验性感染
在瑞典，产维罗细胞毒素的大肠杆菌 O157：H7 的一种特殊亚型，最初定义为噬菌体 4 型，携带两个 vtx2在过去15年中，已经发现基因导致大多数报告的人类感染，包括散发病例和暴发。对此的一个合理解释可能是，这种特殊的亚型更适合于牛定植，因此可能比其他VTEC O157：H7亚型以更高的浓度和更长的时间排泄。
从瑞典乌普萨拉瑞典农业科学大学的传统奶牛场获得了七头年龄在 6 至 9 周之间的瑞典红白品种的断奶前阉割公牛犊。所有犊牛均通过临床检查和血液学分析被认为是健康的。
此外，粪便样本检测冠状病毒和轮状病毒、隐孢子虫属、沙门氏菌属和VTEC O157：H7检测<>次，结果为阴性。为了评估实验期间的健康状况，每天监测一般状况和直肠温度，每周监测一次体重。这些动物以适合其年龄和品种的浓缩饲料为食，并且可以通过水自由获取干草和饮用水。
在2个月内进行，在整个实验过程中，犊牛被安置在瑞典乌普萨拉国家兽医研究所的生物防护3级设施中。他们被随机分配到三组，在松散的条件下安置在三个单独的摊位中，并被赋予识别号码I-VII;A畜栏的小牛I，II，III作为阴性对照，畜栏B中的小牛IV，V，VI和C畜栏的小牛VII。
细菌不可能通过水、饲料、粪便、通风、工具或仪器在摊位之间传播，工作人员在摊位之间更换靴子和防护服。
本实验中使用的VTEC O157：H7分离物于1999年从瑞典传统奶牛场10个月大的小牛粪便中获得。该农场与157年的人类VTEC O7：H1997感染有关。Gautom 描述的脉冲场凝胶电泳基因分型表明，随着时间的推移，该菌株存在于农场犊牛粪便样本中，属于 VTEC O157：H7 如上所述，在瑞典的人类感染中占主导地位。
为了制备接种物，将菌株CCUG 53931在37°C下在补充有18%牛血清的营养肉汤中培养10小时。经测试，富集液中VTEC O157：H7的浓度为1×109CFU/ML通过连续稀释和电镀。通过将1.0ml肉汤转移到25ml 0.1%蛋白胨水中制备四个接种物，并立即通过经口胃插管给予犊牛。
在接种后的前2周每隔一天收集一次粪便样本，然后在实验的其余部分每周取样两次。此外，每周收集一次咽部样本。粪便样本通过直肠指取收集，咽部样本使用无菌棉尖拭子。所有样品在下午收集并以冷藏状态储存。分析在采样后24小时内开始。
定量分析在IMS上培养阳性的样品采样后24小时内开始。通过在157.10%蛋白胨水中连续稀释0 g粪便来计数大肠杆菌O1阳性粪便样品。
将根据先前计数的结果选择来自不同稀释液的0.1ml重复等分试样接种到补充有亚碲酸钾的CHROMagar O25平板上，以下称为ChromO157，并在37°C下孵育21-24小时。记录推定的大肠杆菌O157菌落的数量，并通过乳胶与O157抗血清凝集确认每个样品中的五个这样的菌落。
所有4头接种的犊牛在157 h pi内的粪便中均呈VTEC O7：H53931菌株CCUG 30培养阳性，发生率范围为7.7×103至 6.3 × 105cfu/g粪便， 最大脱落范围为 1.3 × 105至 8.4 × 106不同犊牛的CFU/G，发生在第1天和第7天PI之间。粪便中VTEC O157：H7的脱落数量在前15天pi内减少。
本研究提供了有关奶牛中VTEC O157：H7定植特定亚型动态的信息。该亚型，VTEC O157：H7，经常从瑞典牛中分离出来，并且在过去15年中也被发现导致瑞典报告的大多数人类感染。
在大多数犊牛中，接种了这种特定亚型的代表菌株，脱落细菌的数量在前两周内下降。一头小牛可能被归类为高脱落者，长时间排泄高水平的细菌。
参考文献
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