牛源性産維羅細胞毒素大腸杆菌 O157：H7 特定亞型的犢牛實驗性感染
在瑞典，産維羅細胞毒素的大腸杆菌 O157：H7 的一種特殊亞型，最初定義為噬菌體 4 型，攜帶兩個 vtx2在過去15年中，已經發現基因導緻大多數報告的人類感染，包括散發病例和暴發。對此的一個合了解釋可能是，這種特殊的亞型更适合于牛定植，是以可能比其他VTEC O157：H7亞型以更高的濃度和更長的時間排洩。
從瑞典烏普薩拉瑞典農業科學大學的傳統奶牛場獲得了七頭年齡在 6 至 9 周之間的瑞典紅白品種的斷奶前閹割公牛犢。所有犢牛均通過臨床檢查和血液學分析被認為是健康的。
此外，糞便樣本檢測冠狀病毒和輪狀病毒、隐孢子蟲屬、沙門氏菌屬和VTEC O157：H7檢測<>次，結果為陰性。為了評估實驗期間的健康狀況，每天監測一般狀況和直腸溫度，每周監測一次體重。這些動物以适合其年齡和品種的濃縮飼料為食，并且可以通過水自由擷取幹草和飲用水。
在2個月内進行，在整個實驗過程中，犢牛被安置在瑞典烏普薩拉國家獸醫研究所的生物防護3級設施中。他們被随機配置設定到三組，在松散的條件下安置在三個單獨的攤位中，并被賦予識别号碼I-VII;A畜欄的小牛I，II，III作為陰性對照，畜欄B中的小牛IV，V，VI和C畜欄的小牛VII。
細菌不可能通過水、飼料、糞便、通風、工具或儀器在攤位之間傳播，從業人員在攤位之間更換靴子和防護服。
本實驗中使用的VTEC O157：H7分離物于1999年從瑞典傳統奶牛場10個月大的小牛糞便中獲得。該農場與157年的人類VTEC O7：H1997感染有關。Gautom 描述的脈沖場凝膠電泳基因分型表明，随着時間的推移，該菌株存在于農場犢牛糞便樣本中，屬于 VTEC O157：H7 如上所述，在瑞典的人類感染中占主導地位。
為了制備接種物，将菌株CCUG 53931在37°C下在補充有18%牛血清的營養肉湯中培養10小時。經測試，富集液中VTEC O157：H7的濃度為1×109CFU/ML通過連續稀釋和電鍍。通過将1.0ml肉湯轉移到25ml 0.1%蛋白胨水中制備四個接種物，并立即通過經口胃插管給予犢牛。
在接種後的前2周每隔一天收集一次糞便樣本，然後在實驗的其餘部分每周取樣兩次。此外，每周收集一次咽部樣本。糞便樣本通過直腸指取收集，咽部樣本使用無菌棉尖拭子。所有樣品在下午收集并以冷藏狀态儲存。分析在采樣後24小時内開始。
定量分析在IMS上培養陽性的樣品采樣後24小時内開始。通過在157.10%蛋白胨水中連續稀釋0 g糞便來計數大腸杆菌O1陽性糞便樣品。
将根據先前計數的結果選擇來自不同稀釋液的0.1ml重複等分試樣接種到補充有亞碲酸鉀的CHROMagar O25平闆上，以下稱為ChromO157，并在37°C下孵育21-24小時。記錄推定的大腸杆菌O157菌落的數量，并通過乳膠與O157抗血清凝集确認每個樣品中的五個這樣的菌落。
所有4頭接種的犢牛在157 h pi内的糞便中均呈VTEC O7：H53931菌株CCUG 30培養陽性，發生率範圍為7.7×103至 6.3 × 105cfu/g糞便， 最大脫落範圍為 1.3 × 105至 8.4 × 106不同犢牛的CFU/G，發生在第1天和第7天PI之間。糞便中VTEC O157：H7的脫落數量在前15天pi内減少。
本研究提供了有關奶牛中VTEC O157：H7定植特定亞型動态的資訊。該亞型，VTEC O157：H7，經常從瑞典牛中分離出來，并且在過去15年中也被發現導緻瑞典報告的大多數人類感染。
在大多數犢牛中，接種了這種特定亞型的代表菌株，脫落細菌的數量在前兩周内下降。一頭小牛可能被歸類為高脫落者，長時間排洩高水準的細菌。
參考文獻
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