光绪三十四年，1908年十月二十一日，38岁的光绪帝驾崩。清史中记载光绪帝是病死的，而清末名医桂庭却记载光绪帝死前肚痛难忍，在床上翻滚，舌头发黄发黑，是中毒的征兆。那么光绪帝死亡的真相是什么呢？
由于光绪皇帝死亡时间并不久远，随着科学技术发展，运用现代科学技术可以分析光绪皇帝的真正死因。2003年，清光绪帝死因专题研究课题组成立，历时五年，运用“中子活化、x射线荧光分析，原子荧光光度等一系列现代专业手段对光绪皇帝的遗骨、头发、衣服等物品进行分析化验。
2008年11月2日，终于，课题组对外公布了光绪皇帝的死因——砒霜中毒。
究竟是谁毒杀了光绪皇帝？慈禧太后的嫌疑最大。慈禧太后死于光绪帝死后的第二天，这很难不引起人们的怀疑，是慈禧太后生前最后的一个决定，要在自己走之前铲除掉光绪帝。加之光绪帝和慈禧太后的矛盾世人皆知，慈禧太后又很不喜欢光绪帝反抗她的权威。
戊戌变法后，光绪帝被慈禧太后关进了中南海的瀛台。早些时候还有两顿饭菜，后来只剩一顿，还都只是干冷变质的剩菜。太监们也嚣张跋扈，有时甚至干脆不送。光绪帝最爱的珍妃，也被慈禧太后下旨投入井中。
也有其他人谋害光绪皇帝的说法。戊戌变法期间，光绪帝打算政变杀死慈禧太后，结果被袁世凯告密导致计划失败。光绪帝因此十分怨恨袁世凯。慈禧太后年事已高，命不久矣，袁世凯怕光绪重新执政后对自己打击报复，于是先下手为强毒死了光绪。
不过究竟是谁毒杀了光绪帝，至今还没有一个准确的定论，只能说，慈禧太后的嫌疑最大。可怜的光绪帝，三十八年的人生，尽活在阴影之中。