撰文：王浩
來源：幹細胞者說
靜下心來
潛心研究
我們将走的更遠
Direct Biologics是一家專注于細胞外囊泡在疾病治療中的應用的生物技術公司。醫學雜志《胸腔》的2023年6月版上報導了該公司的一項多中心、随機雙盲、安慰劑對照的II期臨床試驗，文章題目是《Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell-Derived Extracellular Vesicle Infusion for the Treatment of Respiratory Failure: From COVID-19》。該前瞻性臨床試驗在美國的五家醫院同時開展，入組了102名新冠肺炎引發的中重度急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）患者，幹預方式是在第1天和第4天分别輸注安慰劑、10mL或15mL ExoFlo。總結起來，臨床試驗結果表明ExoFlo在ARDS成年人患者中取得了良好的安全性資料和顯著的療效結果。在整個研究過程中記錄了不良事件。主要結果衡量标準是全因60天死亡率，次要結果包括死亡時間、總死亡率、需接受緊急治療的嚴重不良事件發生率、第7、30和60天出院的患者比例、出院時間以及脫離呼吸機的天數。
1
臨床試驗結果總結
在臨床試驗期間，沒有發現與治療相關的不良事件。所有受試者的總死亡率為61.0%。在分組後分析中，在安慰劑組和ExoFlo-15組中，呼吸衰竭患者的60天死亡率分别為50.0%和19.2%，絕對風險降低30.8%，相對風險降低0.385（95%CI=0.159，0.931；p=0.0340）。對于年齡在18~65歲之間、符合ARDS的修改版柏林的患者群體中，安慰劑組和ExoFlo-15組的60天死亡率分别為72.7%和30.8%，絕對風險降低41.9%，相對風險降低0.423（95%CI=0.173，1.032；p=0.0588）。對于18~65歲年齡組，與安慰劑組相比，ExoFlo-15組的脫離呼吸機天數有所改善，分别為47.6天和30.3天。此外，在這個年齡段的中度和重度ARDS中，脫離呼吸機天數與所用的ExoFlo劑量之間有一定關聯性。
2
産品情況
ExoFlo是Direct Biologics在研的細胞外囊泡治療産品，依照cGMP規範從單一供體BM-MSC的培養液中産生。每批次ExoFlo的放行标準包括蛋白質組、信使RNA和microRNA的鑒定、囊泡大小和數量、外泌體中特異性表達的CD9/CD63/CD81等四次跨膜蛋白的圖譜。
Direct Biologics的研究表明ExoFlo具備與骨髓間充質幹細胞同樣的免疫調節特性和再生特性，同時沒有細胞治療的局限，而且ExoFlo不表達可引發急性排斥反應的免疫原性表面表位。用于産生ExoFlo的骨髓間充質幹細胞具備國際細胞治療協會（ISCT）規定的間充質幹細胞的典型三系分化能力，表面标志CD90和CD166為陽性，CD45為陰性。這些骨髓間充質幹細胞接受了美國FDA評價并在FDA有備案的主檔案，包括獲批的用于二期臨床試驗的ExoFlo的CMC資料。其更早完成的一項治療ARDS患者的安全性臨床研究證明了ExoFlo的安全性。
ExoFlo含有1000多種調節性蛋白，其中典型的蛋白清單如下：
| 蛋白名稱 | 描述 | 功能 |
| VEGFR | VEGF Receptor | 血管生成 |
| VEGF | Vascular Endothelial Growth Factor | 血管生成與趨化作用 |
| ANG1 | Angiopoietin 1 | 血管生成 支援血管内皮生長因子 |
| TIMP‑1 | Collagenase Inhibitor | 抑制基質分解 |
| TIMP‑2 | Collagenase Inhibitor | 抑制基質分解 |
| IL‑1B | Interleukin 1B | 細胞增殖、分化、調節發炎 |
| PDGF‑AA | Platelet Derived Growth Factor | 細胞存活與間充質幹細胞增殖 |
| TGFb3 | Transforming Growth Factor Beta 3 | 調節發炎 |
| bFGF | Basic Fibroblast Growth Factor | 細胞存活與組織再生 |
| HGF | Hepatocyte Growth Factor | 傷口愈合 |
3
使用劑量
值得關注的是，在該臨床試驗中的胞外囊泡ExoFlo的使用劑量的計算依據如下：
1. 有24名患者入組的新冠肺炎ExoFlo的研究；
2. 靜脈注射骨髓間充質幹細胞治療ARDS的代号為START的一期臨床試驗，給出的安全劑量高達500萬個細胞/公斤體重，最高劑量為1000萬個/千克體重；
3. 實驗觀察到每個間充質幹細胞大約分泌2000個胞外囊泡；
4. 實驗室分析表明600至800億個EV/毫升。
從START的一期臨床試驗幹細胞劑量上限推斷，靜脈注射ExoFlo的上限劑量為17.5毫升/70公斤體重，10毫升和15毫升的靜脈注射ExoFlo被确定為合理的低劑量和高劑量組，分别對應着0.9萬億個胞外囊泡和1.2萬億個胞外囊泡。
幹細胞者說小議
新冠疫情肆虐期間，中國也完成了幾個幹細胞外泌體治療新冠肺炎的小型臨床研究：
1.瑞金醫院呼吸與危重症醫學科瞿介明主任領銜的研究：提取脂肪間充質幹細胞外泌體以霧化吸入給藥方式治療7名重症新冠肺炎患者，結果顯示患者們很好地耐受了霧化治療，且所有患者肺部病變均有不同程度的消退，7例患者中有4例較為明顯。
2.無錫第五人民醫院儲美萍主任和無錫市第二人民醫院陳義鋼主任領銜的研究：使用了臍帶間充質幹細胞來源的外泌體，以霧化吸入的給藥方式對7 例新冠肺炎患者（2名重症、5名輕症））進行了幹預，證明外泌體霧化吸入的安全性和初步療效
這兩個臨床研究的胞外囊泡/外泌體的使用途徑與前述ExoFlo的應用途徑完全不同，前者是霧化吸入，後者是靜脈輸注。哪種使用途徑更安全有效，不同途徑所采用的胞外囊泡/外泌體的劑量如何調整，将需要更多的臨床研究去進一步證明。
部分參考文獻：1.Meiping Chu, Hao Wang, Linjie Bian, Jiehui Huang,，Nebulization Therapy with Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes for COVID-19 Pneumonia，Stem Cell Reviews and Report，04 June 20222.Ying-Gang Zhu, Meng-meng Shi, Antoine Monsel, Cheng-xiang Dai, Xuan Dong, Nebulized exosomes derived from allogenic adipose tissue mesenchymal stromal cells in patients with severe COVID-19: a pilot study，Stem Cell Research & Therapy，26 May 2022
- 科普 情懷 責任 -