Western Blot技術從提出至今已經有四十餘年的時間了，如今仍然廣泛應用于基因在蛋白水準的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。
然而想要得到一張條帶清晰、沒有雜帶、背景幹淨的圖檔，還是具有一定挑戰性的，即使出現了有問題的條帶也不用慌張，裡來分享結果條帶圖示+全面分析，友善大家優化WB實驗程序與結果判定！
注：條帶圖檔均來源于網絡
01沒有任何顯色
原因：具體原因比較多，如果單純一張沒有任何顯色的X光片，最可能是一抗加成其他抗體，或者二抗種屬加錯了，比如兔的加成鼠的；
解決辦法：仔細檢查抗體是否加錯，确認轉膜沒有問題；
經驗：上圖展示的是一點信号都沒有，如果是這樣大部分情況是抗體加錯了。如果中間出現了細微的條帶，可能原因是蛋白上樣量太少，一抗濃度過低，ECL發光液失效。另外如果轉膜出現了問題，比如膜放反了，自然是一張白片。
02高背景
原因：封閉不夠好，一抗濃度高，洗膜時間和次數不夠；
解決辦法：降低一抗濃度，增加洗膜時間和次數；
經驗：高背景可能是WB中最常見出現的問題，目的條帶單一清晰，但是其他地方有彌漫性較為均一的背景（比較連續的）。其實隻要注意操作規範就很容易避免。
03非特異性條帶
原因：一抗非特異性與蛋白結合；
解決辦法：更換一抗；
經驗：絕大多數是因為一抗不好，無法判斷哪一條是目的條帶。如果實在沒有更好的抗體，建議采用陰性對照和陽性對照來确定上述哪個條帶是目的條帶。當然這種情況下有一種很小機率的可能是一抗濃度太高引起的非特異性結合。
04條帶中出現邊緣規則的白圈
原因：電轉中膜和膠之間存在氣泡；
解決辦法：轉膜前去掉膜和膠之間的氣泡。
05條帶中間出現白色（反白）
原因：中心部位高濃度HRP把底物消耗過快，中間部位底物消耗結束之後就不發光了；
解決辦法：降低蛋白量，降低一抗和二抗的濃度。
06出現黑點和黑斑
原因：膜上其他部位與一抗或者二抗非特異性結合；
解決辦法：封閉牛奶一定要純，封閉結束之後要洗；
經驗：牛奶溶解之後，最好靜止一下，然後輕輕地吸取上層牛奶進行封閉，封閉結束之後一定要洗三遍之後再加一抗。
07條帶拖尾
原因：蛋白量太大，一抗濃度和時間太長；
解決辦法：根據情況調整蛋白量，同時一抗濃度和時間也可以縮短；
經驗：這種情況很容易出現，因為很多原因都可能導緻這一個結果。一般來說，蛋白含量都是我們經過很多次摸索得出的最适蛋白量，是以不太可能是蛋白量過多引起的。最有可能的是因為一抗濃度太高，作用時間太長引起的。
08出現重影
原因：熒光強度比較高，在壓片時，放好之後不小心又輕微移動了一段距離；
解決辦法：X光片放上去之後，就不要動了，即使放歪了也沒關系；
經驗：有的時候出現重新剛好在上下位置，并且重影會相對弱一些，不要誤以為抗體識别了該蛋白的另外一種異構形式。
09出現非均一性背景
原因：膜可能曾經幹過；
解決辦法：在每一步的操作過程中，都需要注意不要讓膜幹；
經驗：在封閉的時候，洗一抗，洗二抗，以及發光的時候都時刻需要注意蛋白面不要風幹，風幹之後結果很可能就是這個樣子。注意與高背景差別。
10某個條帶變形
原因：SDSPAGE膠中存在氣泡或者某不溶性顆粒；
解決辦法：配膠過程中要小心，使用無雜質的液體；
經驗：很多實驗室中使用的不是最新的裝置，比如配膠用的海綿墊，如果用了很多年之後，會從下面往上面漏小氣泡，當氣泡足夠小并且膠快凝固的時候，走到中間的小氣泡就停留在膠内，并會影響到後面的跑膠。另外配膠用的水，SDS，Tris緩沖液要注意不要有雜質。
11條帶呈啞鈴狀
原因：配置膠有問題；
解決辦法：把膠配好，不合格的膠堅決不用；
經驗：出現啞鈴最大的可能是膠沒有配置好，膠凝固後不均一。另外還有一種可能是樣品中含有太多雜質，沒有離心下來，然後雜質沉積在孔的中間，蛋白自然被推擠到兩邊。
12最邊緣條帶彎曲
原因：電泳電流不均一；
解決辦法：換用新的電泳槽；不使用兩邊的兩孔；
經驗：上樣最好在膠的中間，這樣電場均一。
13其他問題
（1）蛋白分子量偏高或者偏低。可能是膠的濃度與目的蛋白的濃度不對應；
（2）蛋白質降解。蛋白質降解後很可能會在比原來位置低的地方出現主帶，然後會出現一些其他帶，最主要特點是所有的條帶比正常的都低，并且條帶模糊不清晰；
（3）所有條帶連成一片沒有間隔。原因最可能是上樣量過多，其次是樣品彌散（比如電泳長時間停止樣品彌散）。
14電泳過程中出現現象及問題
（1）整個條帶呈 “ ︶ ” 狀：凝膠冷卻不均一，電泳槽老化；
（2）整個條帶呈“ ︵ ”：凝膠左右兩頭沒有凝固好；
（3）溴酚藍拖尾：樣品溶解不好；
（4）縱向的紋理：上樣樣品中存在不溶性顆粒；
（5）溴酚藍很粗：濃縮膠濃縮效果不好，可能是濃縮膠太短，或者是濃縮膠配錯；
（6）在分離膠中跑不動：Tris-Cl PH值不對，或者忘記加SDS。
以上圖檔均來源于網絡