#历史开讲#使用木瓜花瓣提取物环保地制造银纳米颗粒和其对火枯病的抗菌特性
目前，对于火枯病的化学控制方法包括定期使用铜化合物和链霉素，然而，由于对环境的有害影响，除了环境风险之外，这些化学方法在火枯病控制方面往往效果不佳。
许多计划已经用于合成不同尺寸的SNP，其中包括使用印楝、曼陀罗、木槿大麻、菠萝和紫花蓼提取物。
合成的SNP平均粒径分别为34 nm、15 nm、9 nm、10 nm和74 nm。在本研究中，使用木瓜花瓣提取物来生物合成SNPs，并测试它们在火枯病控制中的作用。
实验材料和方法
收集实验用的梨幼苗，在收集木瓜花瓣，必要时以10 μg/mL 浓度使用链霉素抗生素，每个实验均使用最小抑菌浓度（MIC）的SNP。
为制备木瓜的水性花提取物，首先收集新鲜的木瓜花瓣，并使用75% 酒精进行1分钟的消毒。
用经灭菌处理的蒸馏水洗涤花瓣三次，并将7 克清洁的花瓣放入100 mL 去离子水中煮沸5 分钟，随后以4500 rpm 的速度离心悬浮液5 分钟，通过滤纸过滤得到上清液。
对于SNP 的生物合成，将5 mL 的0.001 M 硝酸银（AgNO3）添加到30 mL 木瓜花瓣提取物中，并将反应混合物在28±1°C 下孵育24 小时。
使用美国Epoch2TC 的紫外可见分光光度计在室温下测量吸收波长范围为350-550 nm，以评估长方形花瓣水提取物中SNPs 的形成。
银纳米颗粒的物理化学表征
使用动态光散射（DLS）技术通过DLS测量来确定新鲜合成SNP的动态特性。
使用25°C温度，50%激光功率，DTC位置向上，波长657.00 nm的测量条件，通过DLS技术获得了不同的参数，包括Zeta平均值和多分散性指数。
Zeta平均值是DLS光谱仪生成的主要且最稳定的参数，生物合成的SNP溶液以10,000 rpm的速度离心5分钟，以去除沉积物。
SNPs的沉淀物粉末用于傅立叶变换红外光谱仪分析，FTIR分析采用4000–400 cm^−1的范围，并使用KBr颗粒技术和PerkinElmer Spectrum 370 DTGS FTIR分光光度计完成。
使用高分辨率X射线衍射技术对晶体金属SNPs的化合物形成、质量、物相鉴定和表征进行了分析，扫描范围为30°至80°的2θ角。
随后在直径为9 cm的培养皿中以28°C孵育48小时，并测量圆盘周围细菌生长抑制区的直径，实验重复了两次，每次重复三次。
抑菌和杀菌浓度的测定
SNP的MIC和MBC使用改进的微量稀释方法进行鉴定，在96孔微量滴定板中，将约100 μL的SNP加入100 μL的Mueller-Hinton肉汤培养基，使得每行第一孔的SNP浓度为500 μg/mL。
随后使用96孔塑料板对SNP进行连续2倍稀释，得到浓度范围从500至0.48 μg/mL，每孔总体积为200 μL。
接下来，从过夜培养的E. amylovora中取出10 μL接种到96孔板的每个孔中，细菌浓度为1 × 10^8 CFU/mL。
对于MBC测定，从上述96孔板的每个孔中取出10 μL，浓度高于MIC，并在28°C下在NA培养基上培养24小时。
MBC被定义为在NA培养基上没有细菌生长的最低SNP浓度，所有实验均进行了三次重复。
体外花和未成熟梨果实接种试验
梨花在花球阶段转移到无菌的10%蔗糖溶液中，菌株在28°C的LB肉汤培养基中过夜生长，然后经离心浓缩。
将100 μL 细菌悬浮液滴在每朵花的杯状花托上，静置1小时后，使用MIC浓度的生物合成SNP溶液喷洒在每朵花上。
作为阳性对照，使用Na/KPi缓冲液中的细菌悬浮液，作为阴性对照，使用Na/KPi缓冲液中的SNPs溶液，将花朵放置在24-26°C、80%湿度的温湿箱中培养。
在一段时间后，对花朵的疾病症状进行调查，使用四个等级进行评估，花朵健康，没有颜色变化，前叶颜色变化和组织变黑，组织、花蕊和花丝颜色退化，整朵花变黑，出现渗出物，症状传播至花梗。
对未成熟的梨果实进行表面消毒，并使用0.1-10 μL、34毫米微量移液器吸头刺破果实表面。
实验进行了三个重复，使用公式计算在5天后坏死面积与未成熟梨果实总面积之比，以指示疾病的严重程度。
实验结果
木瓜花瓣提取物被用作自然资源合成绿色SNPs，SNPs是通过将银离子与花瓣提取物反应过夜而形成的。
动态光散射（DLS）分析被用于确定SNPs的粒子大小。根据数量、体积和强度计算，粒子大小的范围分别为25.46 nm、45.74 nm和77.60 nm，多分散指数为0.21 nm，Zeta平均值为68.38 nm，DLS直方图显示了使用木瓜花瓣水提取物合成的SNPs悬浮液的结果，这与TEM结果一致。
