實際上脂質體的關鍵輔料隻有兩類，磷脂類和膽固醇。制造脂質體，膽固醇是必不可少的輔料，除了溫敏脂質體，它為特殊的動力學特征，為了降低相變溫度時的穩定性，迅速釋放藥物，可不添加膽固醇。本篇主要介紹膽固醇的理化性質，制造及應用。
一、脂質體制劑，為什麼膽固醇必不可少
膽固醇屬于兩親物質，同時具有親油和親水兩種基團，但是其親油性較親水性強，與磷脂互相作用形成脂質體時可嵌入到磷脂分子之間，調節膜結構及性質，提高脂質體功能性。同時可調節磷脂雙分子層膜的流動性，使膜通透性降低，減少藥物滲漏。同時可使脂膜維持一定柔韌性，增強脂質體囊泡抗擊外部條件變化的能力。并對磷脂的氧化有一定保護作用。膽固醇對磷脂的相變具有雙相調節作用。
在相變溫度以上時，膽固醇可抑制磷脂分子中脂肪酸烴鍊的旋轉異構化運動，減少歪扭構象數量，進而降低膜的流動性；在相變溫度以下時，膽固醇又可誘發磷脂分子的脂肪酸烴鍊産生歪扭構象變化，進而阻止膠晶态出現，減少剛性，增加柔韌性。膽固醇又有類似增塑劑樣作用。在脂質體載體中提高膽固醇的比例可增加脂質體的穩定性，降低滲漏率。有報道，在制備脂質體時添加30-50%的膽固醇，可以極大的提高脂質體的載藥量和穩定性。是以在脂質體中膽固醇必不可少。
二、膽固醇的理化性質
18世紀人們從膽石中發現了膽固醇，1816年化學家本歇爾将這種具脂類性質的物質命名為膽固醇。膽固醇是一種環戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇為白色粉末狀固體，室溫下穩定性較好，但對光敏感，是以應該避光、封閉儲存，儲存得當，有效期可達5年。在三氯甲烷中易溶（1g/4.5ml），在乙醚中溶解（1g/2.8ml），在丙酮、乙酸乙酯或石油醚中略溶，在乙醇中微溶，在水中不溶（0.2mg/100ml）。
三、膽固醇的制造技術
3.1動物組織提取
動物組織提取法是以新鮮動物内髒、骨髓及腦為原料，工藝為(1)濃縮提取:将豬牛羊腦子曬幹粉碎放入浸泡罐提取,回收罐中回收,循環浸泡提取；(2)酸化:丙酮提取液濾出放入到反應罐中加入乙醇和硫酸加溫酸化；(3)皂化:酸化的膽固醇過濾放入反應罐内加入乙醇和氫氧化鈉加溫皂化; (4)清洗:皂化後的膽固醇放入反應罐中加熱,過濾,冷卻結晶。此類工藝簡單可行，是目前國内膽固醇的主要生産工藝，然而易受到原料供應的限制，且有使産品殘留緻病基因的可能。
3.2羊毛脂提取
羊毛油脂是羊毛工業的副産品，羊毛油脂中膽固醇含量較高，約10%至15%，且成品低廉來源豐富，穩定性及安全性高，國外大部分膽固醇都是以羊毛脂為原料。但羊毛脂中的膽固醇多與羊毛脂酸結合以酯的形式存在，而且膽固醇類似物很多，是以要得到純品，對技術要求很高。通過皂化工藝使膽固醇遊離出來，皂化得到的膽固醇還含有大量的脫氫膽固醇、二氫膽固醇等類似物，因分子結構相似，性質相近，給分離帶來困難，成為工藝難點和關鍵點。但是，随着對藥品安全性的重視，羊毛脂來源的膽固醇必定會逐漸取代動物内髒來源的膽固醇。
具體制備工藝如下：
(1)将羊毛脂、稀釋劑、氧化鈣、水及相轉移催化劑混合，升溫進行皂化反應，獲得羊毛脂皂化産物；
(2)從所述羊毛脂皂化産物中分離獲得羊毛脂醇；
(3)在水、乙醇、有機溶劑的存在下，使所述羊毛脂醇與氯化鈣接觸獲得膽固醇氯化鈣絡合物；
(4)将所述膽固醇氯化鈣絡合物進行解絡，然後固液分離獲得膽固醇粗品；
(5)将所述膽固醇粗品與低級有機酸和低級醇的混合溶劑混合，重結晶獲得膽固醇成品。
四、膽固醇應該怎麼選擇
膽固醇可提高脂質體的穩定性，是制備脂質體不可或缺的物質。膽固醇輔料如何挑選，必須是已認證關聯審評，注射級和高純度。采用的原料為羊毛脂生産的膽固醇，純度高達99%，雜質相對較少，是脂質體研發和生産的最佳選擇。
五、膽固醇在上市脂質體及工藝中的用法用量舉例
制備普通載藥脂質體，膽固醇(供注射用)是必須的添加物，用量一般為CHO:PC=0.3:1（摩爾比）。因PC和藥物的不同，存在膽固醇的最佳用量。在一定範圍内，脂質體的粒徑、氧化穩定性、實體穩定性與膽固醇添加量成正相關，超出範圍時，超過膜負荷，會造成部分脂質體破裂。
另外，膽固醇的添加會對膜相變溫度有一定影響，臨界值以内使相變溫度降低，臨界值以上，使相變溫度升高。形成脂質體結構時，膽固醇嵌插在磷脂雙分子層上，是以可調節膜的流動性，作用随溫度的不同而改變。在相變溫度以上，它能使磷脂的脂肪酸鍊運動性減弱，進而降低磷脂分子的流動性;而在相變溫度以下時，則可通過阻止磷脂脂肪酸鍊的互相作用，緩解低溫引起的磷脂分子流動性劇烈下降。
膽固醇已廣範應用于上市脂質體産品處方，并在多個臨床階段的脂質體項目中得以應用，如順鉑脂質體Lipoplatino ，多柔比星Doxil，兩性黴素B AmBisome，柔紅黴素DaunoXome，布比卡因EXPAREL，維替泊芬Visudyne等。
膽固醇用法用量舉例如下：
5.1 兩性黴素B脂質體注射液(Ambisome，1990)
膽固醇用法:與磷脂和藥物一起溶于有機溶劑，旋蒸、抽真空制膜。用量：52mg/瓶
5.2 多柔比星脂質體注射液(Doxil, 1995)
膽固醇用法:注入法，與磷脂一起溶于有機溶劑，快速攪拌條件下緩慢勻速注入适當濃度的硫酸铵溶液。用量：3.19 mg/mL
5.3 布比卡因脂質體注射液(Exparel, 2011)
膽固醇用法:與磷脂--起溶于有機溶劑，快速剪切條件下與含有布比卡因的水溶液混合、乳化形成初乳。用量：8.2mg/ml
六、在近期國内脂質體研發中的磷脂與膽固醇比例
查閱了近期國内脂質體研發報道，摘錄制備工藝中磷脂與膽固醇比例舉例如下：
- 譚李玉等制備了杜鵑蘭酮脂質體,确定膽固醇與大豆磷脂品質比為1:8。
- 嵇晶等制備丹參總酚酸複合磷脂脂質體，磷脂與膽固醇品質比為3∶1。
- 屈曉梅等制備了舒馬普坦脂質體，卵磷脂/膽固醇比5.4:1,。
- 張璐等制備了紫杉醇五味子乙素脂質體，磷脂44 mg、膽固醇8 mg。
- 王溪淼制備卡培他濱與奧沙利鉑複方脂質體，磷脂與膽固醇之比為3:1。
- 邢宇等制備了銀杏内酯B脂質體， 160 mg蛋黃卵磷脂、40 mg膽固醇。
- 王成祥等制備了鹽酸阿黴素-黃芪甲苷脂質體，磷脂濃度為8 mg/mL,磷脂與膽固醇比為10∶1,藥脂比為1∶5。
- 呂佳佳等制備紫杉醇/姜黃素雙載藥脂質體，磷脂濃度40 mg/mL,磷脂-膽固醇比4∶1,藥脂比1∶40,水化媒體為pH 6.5的PBS緩沖液。
膽固醇是脂質體制劑中的主要成分之一，對維持脂質體膜結構、穩定性等起重要作用。制備脂質體，必須選擇通過關聯審評，注射級和高純度的膽固醇。現在膽固醇在脂質體制造中必不可少，但即将部分替代或全部替代。已有報道采用與膽固醇結構相似且具一定藥理活性的甾醇、皂苷類化合物替代脂質體處方中膽固醇，同樣能形成性質良好的脂質體。
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